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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 请教大神,有关质粒提取及转染、表达 已有1人参与

要把大肠杆菌里面存储的已经构建好的质粒提取出来,然后导入另一种大肠杆菌或者毕赤酵母里进行表达,老师说不能提PT7开头的,那我该提什么呢?PESC?又或者PET?这些都表示什么呢?
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-03-07 10:23:39
PT7和pET应该都是T7启动子启动基因表达的,该启动子只能被T7 RNA聚合酶识别,因此如果做表达,应该选择DE3溶源宿主如BL21(DE3)、Rosseta(DE3)等等。
老师的意思是不是让你注意一下合适的启动子啊~
2楼2016-03-03 19:06:41
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-03-03 19:06:41
PT7和pET应该都是T7启动子启动基因表达的,该启动子只能被T7 RNA聚合酶识别,因此如果做表达,应该选择DE3溶源宿主如BL21(DE3)、Rosseta(DE3)等等。
老师的意思是不是让你注意一下合适的启动子啊~

所以PT7开头的提取质粒了也不能表达对么?可是现在手里只有PT7,PESC-HIS开头的啊,,,别人说PET开头的提取质粒可以表达对么?我都不懂,这些编码都表示什么啊。。。急死了。。。
3楼2016-03-06 20:42:35
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小李纸11

银虫 (正式写手)

这两个是都不行吗?那我该怎么办?要自己构建合适的质粒吗?
4楼2016-03-06 20:44:18
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李纸11 at 2016-03-06 20:42:35
所以PT7开头的提取质粒了也不能表达对么?可是现在手里只有PT7,PESC-HIS开头的啊,,,别人说PET开头的提取质粒可以表达对么?我都不懂,这些编码都表示什么啊。。。急死了。。。...

质粒是都可以提取的,但是表达的话一定要看质粒上的启动子会不会被宿主表达,你一定要问一下老师,您的表达宿主是什么?
5楼2016-03-07 09:18:36
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-03-07 09:18:36
质粒是都可以提取的,但是表达的话一定要看质粒上的启动子会不会被宿主表达,你一定要问一下老师,您的表达宿主是什么?...

要在大肠杆菌里面表达,有TB1,BL21,Rosetta等等。。。
6楼2016-03-07 11:43:53
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小李纸11 at 2016-03-07 11:43:53
要在大肠杆菌里面表达,有TB1,BL21,Rosetta等等。。。...

要看看是不是(DE3),也就是T7RNA聚合酶整合到基因组的,如果是,那就可以用的

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-07 16:41:30
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