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fanfanzs

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌PCR成功的几率小

请教一下各位大神,真菌PCR凝胶电泳图的引物二聚体很亮,正确条带成功的几率很小(如图),偶尔成功的条带跟DNA的浓度并不成正比。已测过DNA浓度,大概在几ng/μL。
ITS ITS2区通用引物:
      forward primer(5'-3'):GCATCGATGAAGAACGCAGC  (F2045)
      reverse primer(5'-3'):TCCTCCGCTTATTGATATGC     (R2390)
反应体系:
     95°C预变性5 min;95°C变性30s,55 °C退火 30 S,72 °C 延伸 1.5 min,30个循环;72 °C延伸 8 min。

真菌PCR成功的几率小
Administrator 2016-01-22 21hr 12min.jpg
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