| 查看: 1269 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
小李纸11银虫 (正式写手)
|
[求助]
菜鸟求助，大神莫要耻笑。。。 已有2人参与
|
|
| 现在已经有质粒转化好的大肠杆菌感受态细胞，已经进行完蓝白筛选了，接下来该怎么诱导表达呢(用IPTG诱导），求详细的操作步骤，最详细的那种（比如各试剂加的量等等）。。。谢谢啦! |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
小李纸11
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1796.5
- 散金: 322
- 红花: 7
- 帖子: 383
- 在线: 34.1小时
- 虫号: 4177857
- 注册: 2015-10-27
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2016-03-01 16:40:57
2楼2016-03-01 10:45:16
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
1.蓝白斑筛选的转化子，要经过酶切验证确认为正确的克隆，必要的时候进行测序。2.拿到正确的克隆后（通常已经保存为甘油管），晚上转接至5ml的LB液体培养基，过夜37°培养。3.早上取出过夜培养物（可以暂时放置4°，待中午左右转接），按百分之一的比例转接至50ml的LB摇瓶（250ml瓶），37°摇床继续培养至OD0.6-0.8左右。4.取出来加IPTG诱导，诱导终浓度我们通常选择0.4mM，第一次做可以进行剃度诱导（就是多转接几个摇瓶，分别加不同浓度iptg），5.将添加诱导剂后的摇瓶放至摇床诱导，诱导温度一般可以选择几个常用，20°，25°，30°，37°都可以尝试，160rpm过夜诱导。6.过夜后，将菌液离心去上清，菌体用低浓度PBS重悬后（一般浓缩十倍），进行超声破碎。7.破碎后离心，将上清沉淀分离后，分别进行SDS_PAGE检测，检测目的蛋白。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-01 12:32:58
小李纸11
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1796.5
- 散金: 322
- 红花: 7
- 帖子: 383
- 在线: 34.1小时
- 虫号: 4177857
- 注册: 2015-10-27
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
5楼2016-03-01 16:42:11
28