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苍蝇小田七

铜虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收纯化的DNA浓度太低不能用于连接载体,请教如何提高DNA浓度已有3人参与

从头说起是这样的,我是使用试剂盒提的核酸,提取后电泳没有条带。后来我用特异性引物进行了扩增,扩增结果不错,条带单一,位置大体也对,但是亮度一般。由于我的核酸不多,现在也就是还有30ul,而每次扩增模板量要2ul,所以今天上午我就把模板稀释了一下,用这个稀释的DNA又进行了扩增,准备回收纯化其中的DNA。可是PCR后电泳的结果不好,比较不亮,但是我坚持进行了切胶回收纯化,使用的是宝生物的盒子,回收后又电泳了一次,这次条带的亮度也就是能刚刚看到的样子,我自己知道这个浓度是不能做往下做连接的。求大神不吝赐教!另外还是有个问题,我发现回收后的条带位置比我PCR扩增的条带的位置更靠上了,这是怎么回事?今天没能拷出来电泳图,如果需要我后续补充。谢谢各位了!!!!
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

试试用回收后的产物做模板,再次扩增
发展才是硬道理!
13楼2016-03-02 19:15:38
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:11:45
1.PCR后电泳的结果不好,你的PCR条件有没有优化?有些PCR酶只能耐94℃,如果用98℃变性的话,就不行了。还有退火温度什么的,都会影响PCR结果的。
2.回收后的条带位置比我PCR扩增的条带的位置更靠上。你是两个样品在同一块胶上跑的吗?
2楼2016-02-27 21:16:19
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fudan671

木虫 (著名写手)

3楼2016-02-27 21:37:18
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jackyoung

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:12:02
是提的DNA么?PCR的引物和条件有没有优化?目前这一步只能从提高PCR括增的量方面来优化。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
4楼2016-02-28 00:15:16
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