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急盼回复：能否利用原核表达来对真核生物的蛋白进行结晶及结构解析
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大家好。我是一位在读博士，老板给我定的课题是对一种真菌的蛋白通过结晶学的方法进行结构解析，蛋白通过原核表达得到。说实在的，蛋白结构解析不但在我们实验室甚至在我们学校进行的也很少，所以好多问题都无从下手。现在我已将这种蛋白在原核表达系统里（pET28a/Rossatta）得到了可溶性表达，但蛋白纯化效果不太好（纯化后有杂带）。 我在进行课题研究的过程中，一个问题一直困扰着我，那就是真核生物的蛋白通过原核表达的方法进行结晶及结构解析是否可行？因为真核生物的蛋白在翻译后要经过翻译后修饰及二硫键的形成等折叠步骤，而这些在原核表达系统中是不可能实现的。我一直担心将来即使我拿到晶体并得到结构，在发表文章时若编辑过分强调这个问题，那我就要“死悄悄”了。所以在这儿想请教各位：“利用原核表达来对真核生物的蛋白进行结晶及结构解析”是否可行？如果可行的话是否还要验证表达出的蛋白的生物活性？能否推荐几篇这样的参考文献？说实在的，如果不行的话我就必须得考虑换酵母表达系统了，尽管本人十分不愿意，毕竟我现在已博二了，还有好多事情要学要做。诚恳地希望得到您的解答。 [search]真核生物蛋白解析[/search] |
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