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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » HPLC分离糖分
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 joy211087 的 5 个金币
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joy211087

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] HPLC分离糖分

各位大侠你们好，小弟目前从事的研究与糖类转化有关，实验室目前买了一台安捷伦1200，配备了rid检测器，目前买了一个Zorbax carbohydrate column，但是发现根本分不开果糖葡萄糖等等。
使用的流动相就是乙腈和水75：25，  1ml/min，温度30°
目前两者都在5min出峰，而且反应中可能存在羟甲基糠醛，单独跑了标准样品，也是在5min出峰。
还有一个问题，即使是单独测葡萄糖，也发现可能有一个其他问题，2.0mg/ml的样品测试之后积分面积是1130000，太大了，就算能接受吧，可是0.4mg/ml的积分面积1100000，这相差太小了啊。
请问是什么问题？？？  是柱子不行么，选择错误还是柱子质量问题（新买的啊）。

紧急求助！！！！！

还有额外金币奉送，谢谢了。
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1楼 2008-10-11 15:41:25
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lankywang

金虫 (著名写手)
把流动相改动一下看看啊，比如改成乙腈：水=50：50试试看，
还有进样浓度太大了，2mg/ml太大了，
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4楼2008-10-11 21:18:38
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shilywzz

金虫 (小有名气)
没用过RI检测器，我看色谱条件都正常。
问题还是在检测器上，你再琢磨一下这个东西吧。
看看说明书，是不是哪里误操作
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2楼2008-10-11 16:04:19
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wuelite1985

至尊木虫 (小有名气)
检测器可能有问题，使峰面积异常，检测器温度是否异常？再者，进样量太大，超出检测范围，也会引起峰面积不准
至于出峰，可能是色谱柱不对口，柱效不够好，有文献用（150 mm ×4. 6 mm i. d. , 5 Lm|）色谱柱；流动相是否也出问题，比如乙腈泵、水泵各自流量是否正常？假如两者中一个泵堵，出峰就会异常
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3楼2008-10-11 19:22:09
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evilzhou

金虫 (小有名气)
RID 比较麻烦 要充分考虑一下RID的测试条件
waters 的carbohydrate 柱上有糖的分离样本可以参考一下
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5楼2008-10-12 16:00:05
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