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joy211087

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] HPLC分离糖分

各位大侠你们好,小弟目前从事的研究与糖类转化有关,实验室目前买了一台安捷伦1200,配备了rid检测器,目前买了一个Zorbax carbohydrate column,但是发现根本分不开果糖葡萄糖等等。
使用的流动相就是乙腈和水75:25,  1ml/min,温度30°
目前两者都在5min出峰,而且反应中可能存在羟甲基糠醛,单独跑了标准样品,也是在5min出峰。
还有一个问题,即使是单独测葡萄糖,也发现可能有一个其他问题,2.0mg/ml的样品测试之后积分面积是1130000,太大了,就算能接受吧,可是0.4mg/ml的积分面积1100000,这相差太小了啊。
请问是什么问题???  是柱子不行么,选择错误还是柱子质量问题(新买的啊)。

紧急求助!!!!!

还有额外金币奉送,谢谢了。
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wuelite1985

至尊木虫 (小有名气)

检测器可能有问题,使峰面积异常,检测器温度是否异常?再者,进样量太大,超出检测范围,也会引起峰面积不准
至于出峰,可能是色谱柱不对口,柱效不够好,有文献用(150 mm ×4. 6 mm i. d. , 5 Lm|)色谱柱;流动相是否也出问题,比如乙腈泵、水泵各自流量是否正常?假如两者中一个泵堵,出峰就会异常
3楼2008-10-11 19:22:09
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shilywzz

金虫 (小有名气)

没用过RI检测器,我看色谱条件都正常。
问题还是在检测器上,你再琢磨一下这个东西吧。
看看说明书,是不是哪里误操作
2楼2008-10-11 16:04:19
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lankywang

金虫 (著名写手)

把流动相改动一下看看啊,比如改成乙腈:水=50:50试试看,
还有进样浓度太大了,2mg/ml太大了,
4楼2008-10-11 21:18:38
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evilzhou

金虫 (小有名气)

RID 比较麻烦 要充分考虑一下RID的测试条件
waters 的carbohydrate 柱上有糖的分离样本可以参考一下
5楼2008-10-12 16:00:05
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