应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 全菌加loading buffer煮样后，出现沉淀，这问题咋解决……
111/2返回列表12下一页
查看: 6946  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

princessliu

新虫 (初入文坛)

[求助] 全菌加loading buffer煮样后，出现沉淀，这问题咋解决…… 已有3人参与

求助啊~大肠杆菌诱导表达蛋白后，取全菌和破碎后菌体加还原的6*loading buffer煮样10分钟，出现沉淀。离心，取上清上样，但没有目标蛋白的条带，或是很浅。但以前跑过就不会有沉淀，蛋白量也很高。重配了buffer煮样，一样出现沉淀……这问题咋解决……求助……
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-27 14:35:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

1510050322

银虫 (初入文坛)
应该是你煮样的温度太高了吧。使得蛋白变性了吧。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-07-29 21:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是因为蛋白量太大了，煮了之后变性凝集沉淀，一般都是少量蛋白煮后电泳的。
也有可能是大肠杆菌蛋白表达后的样品没有裂解完全，还有部分细胞或碎片，裂解的时间再长些会好一点，即使出现沉淀，经过4度离心，取上清即可测浓度，跑电泳。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-27 15:51:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

princessliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-27 15:51:26
可能是因为蛋白量太大了，煮了之后变性凝集沉淀，一般都是少量蛋白煮后电泳的。
也有可能是大肠杆菌蛋白表达后的样品没有裂解完全，还有部分细胞或碎片，裂解的时间再长些会好一点，即使出现沉淀，经过4度离心，取 ...

那我是否可以取菌样品量少一点，loading buffer加多一点煮样，这样是不是可以避免沉淀？因为我离心后，确实是电泳后染色，明显条带没有以前颜色深了……
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-28 08:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by princessliu at 2015-07-28 08:20:51
那我是否可以取菌样品量少一点，loading buffer加多一点煮样，这样是不是可以避免沉淀？因为我离心后，确实是电泳后染色，明显条带没有以前颜色深了……...

可以，但是要确保样品裂解完全
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-07-28 09:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

princessliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-28 09:06:42
可以，但是要确保样品裂解完全...

啥叫裂解完全？你是说菌破碎完全吗？
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-28 09:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by princessliu at 2015-07-28 09:39:32
啥叫裂解完全？你是说菌破碎完全吗？...

嗯，对，就是这个意思＜（＾－＾）＞
还有要注意一下溶液的PH值，如果PH值越接近蛋白等电点，就越容易沉淀。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
6楼2015-07-28 10:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咦猪头黄大侠

新虫 (初入文坛)
没遇到过这样的情况，过来取取经
赞一下 回复此楼
啦啦啦，啦啦啦，我是卖报的小行家
8楼2015-07-30 16:46:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

princessliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 1510050322 at 2015-07-29 21:49:35
应该是你煮样的温度太高了吧。使得蛋白变性了吧。

你建议多少度？我一直都是100度10分钟，之前都没出现过这问题，就是菌浓度一高就会出现沉淀，增加loading buffer的比例之后煮样，沉淀会少些，但依旧会出现……怎么办~
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-31 09:32:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

范范范范

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以在煮样是加一些SDS促溶一下，即配胶使用的SDS溶液，加个5ul就可以了
赞一下 回复此楼
烦烦烦烦
10楼2015-07-31 10:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 princessliu 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 化工270求调剂 +6 什么名字qwq 2026-03-02 6/300 2026-03-02 10:21 by 黑！在干嘛
[考研] 282求调剂 +3 2103240126 2026-03-02 4/200 2026-03-02 09:25 by 汪！？！
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭