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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 放线菌的庆大霉素，利福平抗性筛选
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xp634768210

新虫 (初入文坛)

[求助] 放线菌的庆大霉素，利福平抗性筛选 已有2人参与

各位大神：
             本人最近刚接触微生物知识，导师安排一个关于放线菌抗生素筛选的实验，我现在有一株链霉属的放线菌，有PDA培养平板若干和IPS2液体培养的孢子，现在遇到的问题有，1.孢子悬浮液怎么制备？2.悬浮液浓度怎么调整？（文献上让调整到1/100000),3.怎么判断MIC，是根据菌落的数量吗？求各位帮助，多谢！！！
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1楼 2014-06-23 17:15:23
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轻风CYg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.孢子悬液的制备:先将菌种接种于试管斜面，待菌体成熟长出孢子，再用无菌生理盐水洗下孢子，即得孢子悬液。
2.浓度调整:先对孢子悬液进行血球计数板计数，然后梯度稀释至你所需的浓度即可。
3.至于怎么判断MIC在下不知道哈，网上查一下吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-06-24 12:52:40
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xp634768210

新虫 (初入文坛)
大神：浓度的确定可以用酶标法或分光光度计测定吗？另外，不会血球计数法呀
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3楼2014-06-24 16:57:41
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xp634768210

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 轻风CYg at 2014-06-24 12:52:40
1.孢子悬液的制备:先将菌种接种于试管斜面，待菌体成熟长出孢子，再用无菌生理盐水洗下孢子，即得孢子悬液。
2.浓度调整:先对孢子悬液进行血球计数板计数，然后梯度稀释至你所需的浓度即可。
3.至于怎么判断MIC在 ...

可否留下邮箱一枚，最近做实验着急，急需帮助
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4楼2014-06-25 15:32:38
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璐太弯

新虫 (正式写手)
请问 您还在做MIC实验吗？我结果很反复不知道哪里有问题
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5楼2015-06-26 09:47:56
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助！ 2015-06-26 17:28:19
个人感觉1和2其实是一个问题，如楼上所说，你洗下斜面孢子，得到的实际不是孢子悬液，因为很容易刮到菌丝，需要过滤一下，然后稀释涂布就行了，多做几组平行样，根据最后的结果判定你的孢子悬液浓度，后面你就可以用上面同样的稀释倍数，稀释到你想要的孢子浓度了（如1/100000）。
最后是MIC的问题，找到一个例子，希望对你有帮助：
致病真菌MIC值测定： 各菌培养24h后，分别用血细胞计数板镜下计数，并以RPMI1640培养液调整浓度至1000～5000个/ml。取无菌96孔板，于每排1号孔加RPMI1640 100微升作空白对照; 3～12号孔各加新鲜配制的菌液100微升；2号孔分别加菌液192微升和氟康唑注射液8微升。2～11号孔10级倍比稀释，使各孔的最终氟康唑浓度分别为80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.32和0.16微g/ml；12号孔不含药物，作阳性对照。各药敏板于30℃培养24h后，用酶标分析仪于620nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC80（真菌生长80％被抑制时的药物浓度）。当药物的MIC80值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计：MIC80值高于最高浓度80微g/ml时，计为“＞80微g/ml”；MIC80值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“≤0.16微g/ml”。
若是要考察其它药物的MIC，把氟康唑换作其它药物即可
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青春留不住，白发自然生！
6楼2015-06-26 13:47:47
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