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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关RT-PCR，请教有经验的虫友！先谢了！
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LOTOS886

木虫 (小有名气)

[求助] 有关RT-PCR，请教有经验的虫友！先谢了！

小弟，现在想做RT-PCR，需要提取癌细胞总RNA，然后反转录为cDNA，再进行Real time PCR定量分析。
1、请问，用哪家公司的试剂盒比较好，包括提RNA、cDNA合成、Real time PCR所用的试剂盒。
2、在用试剂盒提取RNA之前，需要对细胞做怎样的处理？比如，是否需要裂解细胞？若需要，用什么试剂，该怎么做？

小弟试验比较着急，多谢诸位战友了！
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1楼 2012-08-10 09:51:29
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖帮助回答问题。 2012-08-10 20:18:52
amisking: 回帖置顶 2012-08-10 20:18:54
用trizol试剂提取总RNA，在逆转录，然后进行RT-PCR，如果做绝对定量PCR的话，可将cDNA10倍梯度稀释，设置阴性，阳性对照。还要有内参基因做标准CT-DNA质量曲线，通过样品的CT值就可以知道该基因的表达情况了。不知道这个符不符合你的情况，呵呵。。。。
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5楼2012-08-10 15:39:58
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
使用Invitrogen的Trizol试剂提取总RNA，然后做逆转录和RT-PCR，可以使用Takara的或者小日本的TOYOBO的，都挺好使的
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2楼2012-08-10 13:06:36
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提取RNA可以用QIAgen或Invitrogen的试剂盒，反转录可以用QIAgen或ABI，real time就用ABI的吧，具体步骤和处理方法试剂盒说明书里都有的。
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3楼2012-08-10 14:09:04
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蓝天_1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
回答：1、可以试试TAKARA的性价比好
2、提取RNA时，Trizol有自带说明书，上面有具体的处理方法。
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4楼2012-08-10 15:02:23
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
天根的Trizol A+试剂提取总RNA，用全式金的试剂盒RT-PCR这个盒子比宝生物的便宜，而且比他们家的好用。经验总结，祝好运！
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
6楼2012-08-10 16:37:54
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