| 查看: 2893 | 回复: 4 | ||
胡化静木虫 (小有名气)
|
[求助]
上下游引物的，退火温度怎么设？已有2人参与
|
| 我的上下游引物的Tm相差20度，一个63.7，一个83.1，退火温度我设定的是62。P不出来，连引物二聚体都没有。有没有高手指点一下？ |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨分散剂
已经有4人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有263人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 设计引物Tm值过高？？？
已经有7人回复
- 如何利用文献找到的引物查找目的模板？
已经有8人回复
- M13通用引物为什么有这么多种？
已经有6人回复
- PCR引物退火温度怎么计算？
已经有3人回复
- 上下引物的Tm温度不同，怎么确定退火温度？
已经有12人回复
- 求助各位高手：做SSR分子标记时，只知道上下游引物,请问如何知道所需目的片段的大小
已经有9人回复
- PCR时退火温度比tm值高，可以吗？
已经有35人回复
- PCR中退火温度的选择
已经有11人回复
- 兼并引物的退火温度
已经有5人回复
- 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊
已经有26人回复
- 想向大家请教一下银的退火温度
已经有7人回复
- 上下游引物退火温度相差16℃， 是不是不能p出来啊
已经有6人回复
- 上下游引物退火温度相差16℃，
已经有4人回复
- 关于PCR退火温度
已经有17人回复
- 自设简并引物几对，请高手帮检查下~~~
已经有18人回复
- 计算引物退火温度时末端加的酶切位点计算在内吗？
已经有5人回复
- 初级选手，请帮忙看看设计的引物是否合适。谢谢
已经有8人回复
- 【求助】pcr引物退火温度
已经有9人回复
- 【求助】高碳钢高温退火的温度怎么设定？
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR引物加入酶切位点，Tm值是68.5度，退火温度是不是高些了 ？
已经有14人回复
- 【求助/交流】PCR出现SMEAR
已经有9人回复
- 【求助/交流】根据引物的Tm 值，怎么确定退火温度
已经有14人回复
- 【求助/交流】这退火温度怎么算啊
已经有8人回复
- 【求助】PCR退火温度及时间如何确定
已经有10人回复
- 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低？
已经有6人回复
小木虫刘树青
木虫 (著名写手)
夜未眠
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 2293.9
- 散金: 1211
- 红花: 37
- 帖子: 1087
- 在线: 206小时
- 虫号: 1132496
- 注册: 2010-10-26
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
2楼2013-12-15 20:18:26
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-15 21:56:29
胡化静: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-16 09:21:51
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-15 21:56:29
胡化静: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-16 09:21:51
|
你好，你用的DNA聚合酶的说明书上要求的最适退火温度是多少？（有的是Tm低1-2度，有的低5度等等） 1.引物设计的原则之一就是正反向引物的Tm值尽量一致； 2.P不出来常见原因：a.退火温度太高，引物与模板互补配对结合效率低或者不能结合；b.模板GC含量太高，变性时不易解链；c.模板浓度太低；d.模板降解了 3.62度的退火温度，Tm值是83的引物理论上可以和引物互补配对结合了。 建议：1.统计模板GC含量高不高；2.降低退火温度试一试（根据你用的聚合酶的说明来降低） |
3楼2013-12-15 21:16:28
胡化静
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1541.1
- 散金: 10
- 帖子: 101
- 在线: 29.1小时
- 虫号: 2335092
- 注册: 2013-03-10
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2013-12-16 09:28:22
5楼2013-12-17 19:58:32
15