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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌体如何破碎？求助
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M110935

金虫 (小有名气)

[求助] 菌体如何破碎？求助

最近要收集菌体，然后破碎细菌分离上清和包涵体。请问菌体收集后，如何使细菌破碎呢？具体步骤，谢谢
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1楼2012-08-31 09:50:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

M110935

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-08-31 11:16:37
最常用的就是超声裂解，简单方便！

能具体说下操作步骤吗？菌体收集起来后，加的什么裂解液？破碎时的条件？谢谢
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5楼2012-08-31 14:19:51
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-31 16:00:23
M110935: 金币+1, ★有帮助 2012-09-02 08:45:33
我用的是菌体收集之后，加入Tris-HCl悬浮，然后在超声破碎仪下进行破碎，功率和时间根据菌液多少确定。最好在冰上进行破碎，菌液破碎前为乳白色，菌体破碎完毕后为透明，看起来比较澄清。破碎过程中功率不应过大，不能产生大量气泡，否则会破坏蛋白。。。
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7楼2012-08-31 14:36:18
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普通回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-31 16:00:02
加裂解液超声破碎，功率和时间视菌体量而定，开始时可以功率和时间都低点，这样如果没有破碎好，可以继续破碎。工作5秒，停10秒，至乳白色，或用显微镜观察
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2楼2012-08-31 10:03:03
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最常用的就是超声裂解，简单方便！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-08-31 11:16:37
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超声波，碱裂解之类的用的都比较普遍.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-08-31 11:25:49
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M110935

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Marado at 2012-08-31 11:25:49
超声波，碱裂解之类的用的都比较普遍.

能具体说下操作步骤吗？菌体收集起来后，加的什么裂解液？破碎时的条件？谢谢
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6楼2012-08-31 14:19:57
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xfliu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-01 15:43:04
M110935: 金币+1, ★有帮助 2012-09-02 08:46:18
以菌液1/20体积的1倍的PBS缓冲液悬浮细菌，冰上超声破碎，注意功率不要太高，不要起气泡。循环数不要太多，运行2S、间歇6s。如果包涵体含量不是太大的话，几十个循环下来就基本透明了，就可以进行下一步了。包涵体太多的话，再多的循环也透明不了
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8楼2012-08-31 17:35:32
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zhoucd07net

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超声破碎，破碎后的颜色要看你是什么蛋白，澄清……
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9楼2012-09-01 07:20:07
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qq893137

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

工业生产一般先使用碟片离心机进行菌体收集，然后使用高压均质机进行菌体破碎，再使用离心机去除包涵体
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10楼2013-07-03 16:20:19
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