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huichenshen木虫 (小有名气)
小辉辉
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考马斯亮蓝菌体总蛋白浓度相关问题
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一、考马斯亮蓝法测蛋白浓度，干扰物有NaOH、尿素、EDTA等。那么请问我在提取菌体总蛋白的时候（革兰氏阳性菌），用什么方法好？（很多菌体裂解液中的配方中总是有干扰物） 二、用超声破碎破碎菌体提取总蛋白，请问超声破碎的一般条件（革兰氏阳性菌）和超声破碎的缓冲液及其PH值。 三、考马斯亮蓝测蛋白在测OD的时候，用什么来调零？蒸馏水还是蒸馏水和考马斯亮蓝染液的混合物溶液。 四、考马斯亮蓝染色的测量蛋白浓度范围一般是多少？ 五、请问用牛血清蛋白配蛋白标准液时用什么溶液？蒸馏水还是0.15M NaCl 六、有用过考马斯亮蓝测蛋白浓度的人，有什么好的经验可以交流交流。 （问题不一定定都要回答，知道哪个就答哪个，答案越详细越好） [ Last edited by huichenshen on 2012-2-29 at 23:07 ] |
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裂解之后得到的蛋白质浓度很大的，可以稀释之后再测定,如果不放心，就用缓冲液来稀释，就能把干扰因素降低了。 对于标准曲线来说不是毫无上限和下限的，可能是试剂灵敏度不够、仪器不能分辨颜色深度、显色剂过少，所以你要自己摸索一下。 考马斯亮蓝测蛋白在测OD的时候，用蒸馏水和考马斯亮蓝染液的混合物溶液来调零，因为试剂本身也是有吸光度的。 BSA的配制，我没想到那么多，是用水而已。 |
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huichenshen5楼2012-03-02 00:26:52
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7楼2012-03-03 13:22:41
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请先看旧帖，宗家大小姐日向雏田 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3528663&page=1#pid736159 [求助]考马斯亮蓝法测蛋白含量时吸光度A595nm为负值！！！求助 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3315351&page=3#pid1887491 求助！关于考马斯亮蓝制作标准蛋白曲线的问题，麻烦各位进来看下！ http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3315351&page=1#pid1481204 |
2楼2012-03-01 01:37:19
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关于裂解液和考马斯亮蓝的矛盾看到一种很好方案：这种情况可以将BSA溶解于裂解液中来制备标准曲线。 http://protein.dxy.cn/bbs/thread/14339697?keywords=考马斯亮蓝测蛋白#14339697（lscxc的回答） |
4楼2012-03-01 23:09:53
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对于第一个问题，既然提到了超声破碎，当然用这个时要注意破碎的功率和时间； 2、缓冲液的PH对于蛋白质而言通常用到PBS，Trise-HCl，碳酸盐缓冲液等，当然也要看你的目标蛋白的Pi值。 3考马斯测蛋白浓度，校零使用2.5ml的考马斯和0.5的水（总体积3ml）进行校零的。 4、考马斯测定蛋白浓度范围在0-150ug/ml，超出这个范围就不准确了，当然这个方法也有其本事的偏差，我们自己测的时候有时候也不成倍数关系。 5、对于BSA而言，作为标准曲线的制作，我们通常是用水配制的，我是第一次听见要用NaCl配制的，恕我才疏学浅！ |
10楼2012-03-05 12:53:40
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