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真菌基因组提取已有1人参与
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提取真菌基因组我用的是在1.5 mL离心管中，27℃、120r/min 摇床震荡培养了7天的真菌，经称重其菌丝重量大于0.1g（有的到达0.2g）。取离心管放置离心机中以7830rpm，离心10min，分离PDB培养基与菌丝，弃培养基，然后按照索莱宝真菌提取试剂盒的方法来提取真菌的DNA，用Nanodrop去检测其核酸浓度。我做了两星期的实验，大多数浓度为7ug/uL，A260/A20在1.6-2.0的范围内浮动。 ? 我尝试过增加玻璃珠的提取时间与水浴时间，玻璃珠的提取时间从索莱宝说明书里的30min提到45min，再到60min，后发现到60min时，其A260/A280达到了2.2，我的判断是核酸降解了，此后的实验我的玻璃珠的提取时间一般都定在了45min。在加入溶液B时，我有发现离心管中溶液变浑浊了，说明书上说的是此时可能会出现白色沉淀，但放入55℃水浴5min，沉淀会消失，不影响后续实验。但若不消失，可能会导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵住柱子，请增加消化时间。因此我从原本的30min增加到了45min，但它白色沉淀还是消失不了，我还没做把时间增加到60min会怎么样，但他的下一步是加入无水乙醇，加入无水乙醇后溶液竟然变澄清了。 ? 因为我此前提取过植物的DNA，它在加入无水乙醇后会出现大量的白色沉淀，但在这个试剂盒的提取中，我加入了无水乙醇，并没有出现那种大量的白色沉淀，倒是出现了许多白色的非常细小的悬浮物，不知道是不是真菌的基因组。 ? 在整个实验过程中，除了第一步加入溶液A与玻璃珠（我猜测是细胞裂解液）后剧烈摇晃了45min，其余我都没有剧烈摇晃，小心翼翼的颠倒离心管。 ? 发自小木虫IOS客户端 |
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