应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 真菌基因组提取
71/1返回列表
查看: 787  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者Carry Liu将赠送您 5 个金币

Carry Liu

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌基因组提取已有1人参与

提取真菌基因组我用的是在1.5 mL离心管中，27℃、120r/min 摇床震荡培养了7天的真菌，经称重其菌丝重量大于0.1g（有的到达0.2g）。取离心管放置离心机中以7830rpm，离心10min，分离PDB培养基与菌丝，弃培养基，然后按照索莱宝真菌提取试剂盒的方法来提取真菌的DNA，用Nanodrop去检测其核酸浓度。我做了两星期的实验，大多数浓度为7ug/uL，A260/A20在1.6-2.0的范围内浮动。
? 我尝试过增加玻璃珠的提取时间与水浴时间，玻璃珠的提取时间从索莱宝说明书里的30min提到45min，再到60min，后发现到60min时，其A260/A280达到了2.2，我的判断是核酸降解了，此后的实验我的玻璃珠的提取时间一般都定在了45min。在加入溶液B时，我有发现离心管中溶液变浑浊了，说明书上说的是此时可能会出现白色沉淀，但放入55℃水浴5min，沉淀会消失，不影响后续实验。但若不消失，可能会导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵住柱子，请增加消化时间。因此我从原本的30min增加到了45min，但它白色沉淀还是消失不了，我还没做把时间增加到60min会怎么样，但他的下一步是加入无水乙醇，加入无水乙醇后溶液竟然变澄清了。
? 因为我此前提取过植物的DNA，它在加入无水乙醇后会出现大量的白色沉淀，但在这个试剂盒的提取中，我加入了无水乙醇，并没有出现那种大量的白色沉淀，倒是出现了许多白色的非常细小的悬浮物，不知道是不是真菌的基因组。
? 在整个实验过程中，除了第一步加入溶液A与玻璃珠（我猜测是细胞裂解液）后剧烈摇晃了45min，其余我都没有剧烈摇晃，小心翼翼的颠倒离心管。
?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼2022-05-29 00:58:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stonezyw

铜虫 (小有名气)
多请教你身边提取过DNA的师兄再加上多看几篇文章，或许对你有帮助

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
心有猛虎细嗅蔷薇
2楼2022-05-29 03:14:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

褪色的情歌

新虫 (小有名气)
非要在液体培养基里长吗？我之前都是在PDA上刮下来提DNA完全没有出问题呀。你是不是处理材料时没处理好，影响后续实验。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-05-29 10:45:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Carry Liu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 褪色的情歌 at 2022-05-29 10:45:50
非要在液体培养基里长吗？我之前都是在PDA上刮下来提DNA完全没有出问题呀。你是不是处理材料时没处理好，影响后续实验。

PDA的我也做过，有些气生菌丝不是很发达的刮下来带有很多培养基，液氮研磨后效果也不是很好

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2022-05-30 09:21:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liugs

捐助贵宾 (正式写手)

学生芯

【答案】应助回帖

PDA培养基的固体培养的就可以。
我们可以代提取。

博友顺，小刘：13426048039；QQ：462629339
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-01 09:45:38
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pp要努力鸭

新虫 (初入文坛)
请问楼主解决问题了吗？我用固体和液体培养的真菌的提取浓度都不高。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2023-04-19 19:55:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pp要努力鸭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liugs at 2022-06-01 09:45:38
PDA培养基的固体培养的就可以。
我们可以代提取。

博友顺，小刘：13426048039；QQ：462629339

需要提供什么真菌样本呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2023-04-20 18:35:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Carry Liu 的主题更新
71/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大佬们，哪位大神知道E09有没有送啊？ +4 牛棕色左右 2024-05-15 7/350 2024-05-18 22:48 by 牛棕色左右
[教师之家] 谁要做个人网站，可以交流啊！ +11 hjc404 2024-05-14 32/1600 2024-05-18 19:23 by hjc404
[基金申请] 申请基金代表性成果 +11 lancet0903 2024-05-17 11/550 2024-05-18 13:37 by pinyuan33
[基金申请] 河北省基金 +11 3101251516 2024-05-16 18/900 2024-05-18 11:41 by 晓晓爱翠翠
[考博] 换导师 +5 是柠檬呀！ 2024-05-18 10/500 2024-05-18 11:16 by 是柠檬呀！
[论文投稿] 中文投稿 +7 liujinyu80 2024-05-13 7/350 2024-05-18 11:09 by dgfj564
[论文投稿] 求期刊推荐 30+3 jxhx666666 2024-05-15 5/250 2024-05-18 10:03 by dgfj564
[教师之家] 执念 +6 459582015 2024-05-16 7/350 2024-05-18 07:34 by chemhua
[教师之家] 为何一方面国内大学教师无效内卷过劳逝世，而另一方面国家却在硬核科技上被卡脖子深重 +16 zju2000 2024-05-15 20/1000 2024-05-18 07:28 by llhljsy
[论文投稿] 一个审稿人已返回，也没邀请审稿人，也没人审稿中，编辑要闹啥？ 3+3 林师妹 2024-05-14 12/600 2024-05-17 22:33 by 林师妹
[基金申请] 面上评委可能变为7个了，是好是坏呢？ +20 suiyuanwgz 2024-05-15 25/1250 2024-05-17 17:05 by 能丫
[硕博家园] 海外博士，国内博后找工作求建议 +7 905452934 2024-05-16 17/850 2024-05-17 12:41 by 905452934
[教师之家] 普通高校有编制讲师与211高校无编制专职科研岗，应该怎么选 +17 1137025804 2024-05-15 22/1100 2024-05-17 12:10 by cleverly
[教师之家] 另一半是老师会加分哦 +11 acogw9004 2024-05-14 11/550 2024-05-17 11:18 by fysh2023
[有机交流] 爬大板 +4 abcde! 2024-05-12 11/550 2024-05-16 08:33 by 笑看人生1993
[教师之家] 加上“青年”两个字，意义就变了 +10 zylfront 2024-05-13 13/650 2024-05-15 23:36 by flasheagle
[硕博家园] 导师这样说到底有没有机会啊……… +7 理科生yes 2024-05-14 14/700 2024-05-15 18:45 by 理科生yes
[基金申请] 评审规则突发奇想 +18 平凡冰雪花 2024-05-13 23/1150 2024-05-15 15:54 by 平凡冰雪花
[论文投稿] 七个月了，还在selecting for review +3 g9522 2024-05-14 6/300 2024-05-14 19:00 by lizhengke06
[考博] 24/25申博，科研助理找导师 +9 cc毕业了吗 2024-05-12 9/450 2024-05-13 14:31 by zxl_1105
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭