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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 金黄葡萄球菌及枯草芽孢杆菌感受态细胞制备及质粒转化
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Lea__

新虫 (著名写手)

[求助] 金黄葡萄球菌及枯草芽孢杆菌感受态细胞制备及质粒转化已有2人参与

最近一直往金葡和枯草里导入质粒进行下一步实验，用的是ATCC6538和ATCC6633，RP4 plasmid。是不是野生型的这两种阳性菌无法形成感受态？还是宿主是阴性菌的大质粒RP4无法进入阳性菌？查了一些感受态制备方法都试过了，还是无法导入质粒。

是否用金葡RN4220和枯草WB600支撑感受态细胞的效果会更好一些？有没有虫友推荐一些易于制备感受态细胞的这两种菌？我们可以交换或者购买都行～

还是RP4本身无法在阳性菌中存在，需要其他质粒载体或者穿梭质粒？比如pC194等？想请教下大佬们做阳性菌的转化的大多用哪种质粒比较容易转进去？我们需要质粒上带有抗生素耐药基因即可。之前一直做的是阴性菌..感觉有很多细节还不十分清楚，希望得到大神们的指点，还请不吝赐教！感激不尽！
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1楼2021-12-08 17:07:52
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yuanbingzhan


发自小木虫Android客户端
2楼2021-12-08 20:31:26
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屈师兄

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Lea__: 金币+50, ★★★很有帮助 2021-12-11 19:36:29
普通大肠杆菌如DH5α扩增的质粒是无法经过电转化或者化学转化进题主所述的金黄色葡萄球菌中的，需要经过相应菌株甲基化修饰的质粒才可以，如大肠杆菌DC10B或者金黄色葡萄球菌RN4220。也可以通过噬菌体转导的方式进行。
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Lea__
实验使我快乐[捂脸]
3楼2021-12-10 09:03:38
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Lea__

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 屈师兄 at 2021-12-10 09:03:38
普通大肠杆菌如DH5α扩增的质粒是无法经过电转化或者化学转化进题主所述的金黄色葡萄球菌中的，需要经过相应菌株甲基化修饰的质粒才可以，如大肠杆菌DC10B或者金黄色葡萄球菌RN4220。也可以通过噬菌体转导的方式进行 ...

是的我查到的是RN4220能够制成感受态细胞，您的意思是质粒也需要经过甲基化修饰处理才可以导入？我查阅了一些文献，找到了一些宿主是阳性菌的质粒比如pC194/pC221/pPL708等，但我不知道它们是不是经过您说的甲基化修饰....这些在网上都有卖，但因为不确定能否导入现在还不太敢购买。我做的不是分子这块的，只是需要携带质粒的阳性菌去进行实验，不知道好不好买到这样的现成的菌/质粒...
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4楼2021-12-11 19:43:08
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yuanbingzhan


发自小木虫Android客户端
5楼2021-12-13 08:29:13
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安安放

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 屈师兄 at 2021-12-10 09:03:38
普通大肠杆菌如DH5α扩增的质粒是无法经过电转化或者化学转化进题主所述的金黄色葡萄球菌中的，需要经过相应菌株甲基化修饰的质粒才可以，如大肠杆菌DC10B或者金黄色葡萄球菌RN4220。也可以通过噬菌体转导的方式进行 ...

是否应该从已经转导成功的RN4220中提取质粒，再转到标准菌株中？
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6楼2022-01-12 10:57:34
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yyyycc2021

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主做出来了吗，可以交流一下经验；电转化的要求比较高，我做了半年的枯草电转化，成功率比较低，后来转做自然转化，效率比较高且方法比较简单
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7楼2022-07-28 15:34:41
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Lea__

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yyyycc2021 at 2022-07-28 15:34:41
请问楼主做出来了吗，可以交流一下经验；电转化的要求比较高，我做了半年的枯草电转化，成功率比较低，后来转做自然转化，效率比较高且方法比较简单

几十kb的也可以吗？我们后来做枯草能转进去，但是金葡还是不行，暂时没做了

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8楼2022-08-03 00:29:07
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qiulei0125

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yyyycc2021 at 2022-07-28 15:34:41
请问楼主做出来了吗，可以交流一下经验；电转化的要求比较高，我做了半年的枯草电转化，成功率比较低，后来转做自然转化，效率比较高且方法比较简单

你好，请问自然转化是什么意思呢？我也在做葡萄球菌的转化，是经过RN4220修饰后电转到其他葡萄球菌中，结果怎么也转不进去

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9楼2023-12-17 18:45:35
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