应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 肺克基因敲除问题
51/1返回列表
查看: 1411  |  回复: 26
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

garakutadoll

新虫 (初入文坛)
已领完
肺克基因敲除问题
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

本人采用red重组敲除，目的片段750bp左右，先电转入含四环素抗性的pKD46质粒，然后用阿拉伯糖诱导重组酶表达后制作成感受态，电击转化入重组片段（含上下游同源臂各250bp，卡那霉素抗性基因作为插入片段，总长2000bp），但是第二天平板上都没有菌落生长

考虑问题：1.重组片段是不是太长，与目的基因长度相差太大导致重组失败

2.电转效率低，当时电转质粒时只获得一个克隆，可能是感受态制作不行？肺克荚膜很厚，离心的时候很难离到底，是否有解决方法？能否用固体培养基做阿拉伯糖的诱导？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2021-09-03 12:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粥小怡

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，请问您的问题解决了吗？是因为片段太大了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
22楼2021-10-31 00:55:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

张小蛋

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我敲除的是大肠杆菌，上下同源臂200多bp,筛选标记也是卡纳，整个重组片段4000bp左右，转化完后长了三十多个菌落，片段都敲上去了，但是发现好像完成的是单交换，野生型和重组片段都能检测出来，也很是头疼，估计你这个首先要解决的是电转效率的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2021-09-04 11:13:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
秋土豆香2楼
2021-09-03 12:49   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew3楼
2021-09-03 12:50   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
Miya0074楼
2021-09-03 13:12   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
whiteheads5楼
2021-09-03 13:19   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
wyj9706楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
南宫紫玉7楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
muhong19828楼
2021-09-03 13:43   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
nono20099楼
2021-09-03 14:14   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
stylelife610楼
2021-09-03 15:54   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
xqyqwy11楼
2021-09-03 19:17   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
阿文52112楼
2021-09-03 22:02   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
张小蛋13楼
2021-09-04 11:10   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件) 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 科研好难啊，想退学去打工。 +28 byywnyl 2024-04-27 31/1550 2024-05-02 06:06 by 青古
[基金申请] 国家重点实验室基金，通知去答辩。希望大不？ 8+4 qweasd12345 2024-04-26 10/500 2024-05-01 22:12 by 114201801
[基金申请] 多大算大龄？ +3 wyjecho666 2024-05-01 4/200 2024-05-01 21:35 by wyjecho666
[基金申请] 我评审论文会去申请人科研之友上查其论文 +5 zju2000 2024-05-01 7/350 2024-05-01 21:25 by arthas_007
[论文投稿] 求助，论文小修返修以后ScholarOne审稿系统 状态 20+3 15546226191 2024-04-30 7/350 2024-05-01 19:31 by nono2009
[教师之家] 博士毕业找工作选择！ +3 gsq嘿嘿 2024-04-30 4/200 2024-05-01 19:28 by ZHONGWU_U
[论文投稿] 审稿人一收一拒，编辑给了修 +4 njuyck 2024-04-30 5/250 2024-05-01 17:04 by 落雨风霜
[教师之家] 一般发什么文章才能中青基啊 +7 保持肌肤 2024-04-29 7/350 2024-05-01 17:03 by zju2000
[硕博家园] 大家能不能给点意见啊 +4 是小蚂蚁啦 2024-05-01 11/550 2024-05-01 16:18 by 是小蚂蚁啦
[基金申请] 第二次申请青基，祝自己好运! 中! 中! 中! +13 阿豪v5 2024-04-29 15/750 2024-05-01 14:44 by Howard28
[考博] 25年博士申请 +10 Changzixuan 2024-04-25 18/900 2024-05-01 14:03 by 318286986
[基金申请] 关于公布2024年度国家自然科学基金项目申请初审结果的通告 +9 hdzw9071 2024-04-30 12/600 2024-04-30 20:07 by wangzhenyft
[分析] C18色谱柱可以分析单糖，二糖，低聚糖（3-7）吗 +5 备安网公 2024-04-26 6/300 2024-04-30 09:25 by shuiliu
[高分子] 水性聚氨酯 +4 钠与水 2024-04-28 6/300 2024-04-29 20:49 by qiyanjie1008
[论文投稿] 论文录用了让等通知交版面费 5+4 咸鱼酱紫 2024-04-27 4/200 2024-04-29 12:14 by ca0yan9
[考研] 312求调剂 +4 平平无奇小Q 2024-04-26 5/250 2024-04-29 07:33 by 晓目崇
[论文投稿] 求论文投稿期刊推荐 15+3 mihudawang 2024-04-26 7/350 2024-04-28 20:20 by J584326
[有机交流] 锂盐的合成 4+3 liurui1203 2024-04-27 3/150 2024-04-28 10:45 by 591950582
[考研] 没学上 +7 季向阳 2024-04-26 13/650 2024-04-27 20:38 by 一条咸鱼.
[考研] 学硕专硕 +5 小蜗牛* 2024-04-26 5/250 2024-04-26 16:43 by 鱼翔浅底1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭