| 查看: 2752 | 回复: 11 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 艾柏森生物 的 2 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
细胞培养中常见的污染情况及解决方法
|
|||
|
细胞培养中常见的生物污染类型有细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、真菌污染、原虫污染等。它们在细胞培养中污染的特点以及相应的解决方法如下： 1. 细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 解决方法：仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理，如四环素，庆大霉素，或者链霉素。 2. 霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差。 解决方法：用硫酸铜溶液擦拭CO₂孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO₂孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。 预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作 3. 支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。 解决方法：支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有：抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。要注意的是：支原体没有细胞壁，故作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的；对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐火药。对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等，氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常，滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。 4. 黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。 解决方法：对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。 5. 真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。 解决方法：果断扔掉，然后彻底消毒灭菌培养间，CO₂孵箱，器皿和培养液。 6. 原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。它们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但它们的数量小，细胞占优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当它们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。 解决方法：污染的可能原因很多，比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等，如果细胞很多的话，直接扔了重新复苏细胞，如果是保种细胞的话，可购买相关的灭菌试剂。 |
回复此楼» 猜你喜欢
酯化和酯交换
已经有5人回复
-
找工作千万不能来差学校
已经有11人回复
-
华南理工大学彭新文教授课题组招聘博士研究生1名（2024年9月份入学）
已经有4人回复
-
求各位大神推荐复合材料类中文核心
已经有4人回复
-
审稿人一收一拒，编辑给了修
已经有20人回复
-
数据共用
已经有3人回复
-
七级岗，到手不到8000，带本科论文12教学分/生，额定教学分280
已经有26人回复
-
基金函评开始了吗
已经有5人回复
-
等盲审
已经有18人回复
-
要不要二战？
已经有9人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中科院苏州医工所生物材料中心诚聘博士后
+1/83
-
24年北航博士名额，方向低维复合材料或计算化学
+1/76
-
想找一个精通R语言的朋友（真诚交友）
+1/62
-
坐标广东，征女友
+1/46
-
中科院上海高研院上海光源科学中心招收联培研究生
+1/34
-
中建三局铁投华东公司2024届春季校招建造岗补录
+1/33
-
接好运！！南大女副教授毕业6年主持项目经费近1700W，同年获得“优青“和“重点”项目
+1/25
-
寻找一女友
+1/24
-
南京林业大学 国家优青课题组 招收博士研究生
+1/10
-
中国科学院（上海）“博士后独立PI培育”支持计划-神经力学生物学或超分辨成像方向
+1/10
-
天津大学浙江研究院（宁波）诚聘博士后、特聘青年研究员
+1/8
-
国内分析化学投稿
+1/8
-
某央企二级研究院招聘分子筛催化剂研发工程师、单原子催化剂研发副主任，在北京房山
+1/8
-
新加坡国立大学陈小元教授/东南大学谢金兵教授联合诚聘博后
+1/7
-
UTSW Wang 教授招聘博后，研究科学家，博士生和访问学生
+1/5
-
中科院苏州生物医学工程技术研究所生物电课题组招聘博士后/特别研究助理
+1/4
-
英国埃塞克斯大学计算机与电子工程系招收博士 （嵌入式系统，片上系统，FPGA）
+1/4
-
迈阿密大学（University of Miami) 招收博士后 -- 电池方向
+1/3
-
南京林业大学 国家优青课题组 招收博士研究生
+1/2
-
暨南大学微纳光子信息技术团队诚意招聘讲师及副教授（年薪30~60万，安家费20至300万）
+1/1
+1/83
7楼2020-03-17 15:11:56
