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艾柏森生物

铁虫 (小有名气)


[交流] 细胞培养中常见的污染情况及解决方法

细胞培养中常见的生物污染类型有细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑胶虫污染、真菌污染、原虫污染等。它们在细胞培养中污染的特点以及相应的解决方法如下:

1. 细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。






解决方法:仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生素处理,如四环素,庆大霉素,或者链霉素。



2. 霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差。







解决方法:用硫酸铜溶液擦拭CO₂孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

CO₂孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。

其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。

预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作   



3. 支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。






解决方法:支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有:抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。要注意的是:支原体没有细胞壁,故作用于细胞壁生物合成的抗生素,如内酰胺类、万古霉素等是不敏感的;对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐火药。对支原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等,氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常,滤过除菌的方法对支原体是没有作用的。



4. 黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。







解决方法:对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。  



5. 真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。






解决方法:果断扔掉,然后彻底消毒灭菌培养间,CO₂孵箱,器皿和培养液。



6. 原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。它们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但它们的数量小,细胞占优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当它们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。







解决方法:污染的可能原因很多,比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等,如果细胞很多的话,直接扔了重新复苏细胞,如果是保种细胞的话,可购买相关的灭菌试剂。
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多多123米粒

新虫 (小有名气)



艾柏森生物(金币+1): 谢谢参与
4楼2020-01-13 13:23:07
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艾柏森生物

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 多多123米粒 at 2020-01-13 13:23:07
这个棒

谢谢
6楼2020-01-15 08:53:34
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简单回复
tzynew2楼
2020-01-13 08:54   回复  
艾柏森生物(金币+1): 谢谢参与
9 发自小木虫Android客户端
2020-01-13 10:16   回复  
艾柏森生物(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫Android客户端
2020-01-14 08:36   回复  
艾柏森生物(金币+1): 谢谢参与
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