24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
查看: 782  |  回复: 5
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 ZUOZUOYa 的 5 个金币

ZUOZUOYa

金虫 (正式写手)

[交流] 求助pcr扩增

pcr扩2000bp片段,条件变性98摄氏度 30s,退火58℃ 30s,延伸72℃ 1'20''   30cycles,扩增出来条带位置不对,偏小,后来提高退火温度到60℃,pcr结果呈现弥散状态,看不到目的条带,这是为什么,怎么改进
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑暗微光

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-22 22:19:57
用的酶不一样,那个延伸效率不一样。一般我用的2xTag酶效率是1000bp每分钟,可以试着延长延伸时间

发自小木虫Android客户端
2楼2019-05-22 13:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-22 22:20:10
位置偏小值得商榷,要看小多少,marker在不同的胶浓度下相对位置是不一样的。还有就是58跟60的退火温度并不能产生那么大的影响。2000 bp的片段还是很好做的。我觉得模板质量也需要考虑。不行的换酶试试。扩增出来的条带位置大小不对你可以试试降低退火温度,或者做梯度PCR。
3楼2019-05-22 19:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.条带不对,也可能是含有二级结构,可以测序验证一下;
2.没必要98℃变性;
3.换Taq、优化buffer、换引物,都可能会改善
核酸提取与Taqman诊断
4楼2019-05-22 22:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

请教各位

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-05-22 19:49:59
位置偏小值得商榷,要看小多少,marker在不同的胶浓度下相对位置是不一样的。还有就是58跟60的退火温度并不能产生那么大的影响。2000 bp的片段还是很好做的。我觉得模板质量也需要考虑。不行的换酶试试。扩增出来的 ...

条带位置不对可不可能是因为引物没设计好,跑出来的东西不是我想要的?

发自小木虫Android客户端
5楼2019-05-23 10:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
6楼2019-05-23 12:43:17
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 ZUOZUOYa 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 真的好想读博! +15 wangzhe_bs 2024-04-22 20/1000 2024-04-26 21:26 by 小木雄子
[有机交流] 如何分离原料与产品 5+4 qwerasdf587 2024-04-24 12/600 2024-04-26 17:58 by 小肉干
[考研] 学硕专硕 +5 小蜗牛* 2024-04-26 5/250 2024-04-26 16:43 by 鱼翔浅底1
[论文投稿] with editor 两个月了,什么原因? +7 yiersan9 2024-04-24 15/750 2024-04-26 16:13 by jonewore
[硕博家园] 博士白读了 +44 Da_Meng_Zi 2024-04-21 48/2400 2024-04-26 15:59 by s150535912
[考博] 申博求助 +4 dskabdh 2024-04-24 11/550 2024-04-26 15:54 by dskabdh
[教师之家] 博士论文被抄袭 +25 和尚敲小木鱼 2024-04-22 42/2100 2024-04-26 13:55 by ZHONGWU_U
[考博] 25年博士申请 +6 Changzixuan 2024-04-25 11/550 2024-04-26 13:48 by 我属驴核动力驴
[考研] 381求调剂 +4 小刺猬987654321 2024-04-25 6/300 2024-04-26 10:57 by czl12138
[考博] 取博导收留 5+4 zzb777888 2024-04-20 10/500 2024-04-26 08:52 by polymerfriend
[教师之家] 某种做法不行。说过几遍了。同学还那样做。再那样做就给低分 +4 河西夜郎 2024-04-24 4/200 2024-04-26 08:51 by Quakerbird
[考博] 求博导 +6 好okjh 2024-04-21 10/500 2024-04-25 14:04 by 好okjh
[硕博家园] 聊天 +11 暮色恋伊人 2024-04-22 12/600 2024-04-25 13:53 by UCTS
[基金申请] 国社科项目,你们学校都限额申报吗? +7 屡战屡败 2024-04-21 10/500 2024-04-25 12:10 by 屡战屡败
[访问学者] CSC的访问学者申请,没有个评审意见,也不知道怎么改,还有必要申请吗 +4 flyingship 2024-04-20 4/200 2024-04-24 21:09 by 59038mute
[考博] 24年 申博 化学/材料 一作6篇sci +9 wangyp123 2024-04-23 11/550 2024-04-24 19:01 by bangbangbiu
[基金申请] 化学结清有情发出来了 +3 starboy7286 2024-04-20 3/150 2024-04-24 15:52 by 嘿,黑贝
[教师之家] 大家访学都是怎么找的啊? +3 luokereng 2024-04-22 3/150 2024-04-24 11:40 by xuechenli
[考博] 申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区 +4 我属驴核动力驴 2024-04-22 5/250 2024-04-24 08:47 by 晓目崇
[考博] 研二光催化6月底4篇2区 +7 wjtab 2024-04-22 11/550 2024-04-23 06:59 by byron2012
信息提示
请填处理意见