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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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嗯嗯,是的

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导之前有活性,但是纯化不下来,现在诱导不出活性蛋白了已有1人参与

之前诱导出了一点活性蛋白,跑了蛋白胶检测过,然后尝试进行纯化,有时候能挂上柱有时候不能,偶尔能挂上镍柱使用蛋白纯化仪纯化能纯下来的量也很少。目前处于诱导不出活性蛋白的阶段,求助一下有什么好的建议,我已经用了16℃诱导,iptg浓度最低降到了0.025,诱导时间21和23h都用过,之前16℃,0.1iptg浓度,诱导23h出现过少量活性蛋白但是纯化效果不理想。

蛋白诱导之前有活性,但是纯化不下来,现在诱导不出活性蛋白了


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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嗯嗯,是的

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 许苏南 at 2019-05-06 16:32:50
如果试了还没有结果  然后你又必须要这个蛋白的话  你可以找公司帮你纯化一下  2-3周就有结果了  不过现在外面公司很杂 找个有经验的吧

主要是我上学期做的时候还是活性蛋白量大,不知道这学期怎么就没了

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7楼2019-05-11 22:55:58
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普通回帖

hyyyver

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑先37℃,1mM IPTG 诱导检测一下有没有表达,同时做一个WB,检测是否有His 标签。
2楼2019-05-06 15:36:24
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许苏南

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

3楼2019-05-06 16:32:50
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

诱导时间可以降到4小时。

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生物资源交流QQ群:1044518333
4楼2019-05-06 17:34:40
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嗯嗯,是的

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hyyyver at 2019-05-06 15:36:24
可以考虑先37℃,1mM IPTG 诱导检测一下有没有表达,同时做一个WB,检测是否有His 标签。

好滴,感谢,还想请问一下,会不会和超声破碎菌体时候没超破好,导致变性蛋白增多这个情况呢?

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5楼2019-05-11 22:54:16
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嗯嗯,是的

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2019-05-06 17:34:40
诱导时间可以降到4小时。

您说的是16℃诱导4个小时是吗?

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6楼2019-05-11 22:55:11
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 嗯嗯,是的 at 2019-05-11 22:55:11
您说的是16℃诱导4个小时是吗?
...

12都可以。多试试。

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生物资源交流QQ群:1044518333
8楼2019-05-11 23:01:59
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嗯嗯,是的

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopyzxx at 2019-05-11 23:01:59
12都可以。多试试。
...

好滴,感激。还想请问一下就是我这个基因上学期表达蛋白几乎全是活性,这学期都是变性,请问对于这个您有什么好的建议和意见吗

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9楼2019-05-11 23:09:35
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胖成海hhhh

新虫 (初入文坛)

请问 你说的 活性蛋白 什么意思? 你检测了它的活性吗?

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10楼2019-05-14 21:19:56
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