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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 蛋白诱导之前有活性，但是纯化不下来，现在诱导不出活性蛋白了
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嗯嗯，是的

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导之前有活性，但是纯化不下来，现在诱导不出活性蛋白了已有1人参与

之前诱导出了一点活性蛋白，跑了蛋白胶检测过，然后尝试进行纯化，有时候能挂上柱有时候不能，偶尔能挂上镍柱使用蛋白纯化仪纯化能纯下来的量也很少。目前处于诱导不出活性蛋白的阶段，求助一下有什么好的建议，我已经用了16℃诱导，iptg浓度最低降到了0.025，诱导时间21和23h都用过，之前16℃，0.1iptg浓度，诱导23h出现过少量活性蛋白但是纯化效果不理想。

蛋白诱导之前有活性，但是纯化不下来，现在诱导不出活性蛋白了


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼2019-05-06 15:23:31
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嗯嗯，是的

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopyzxx at 2019-05-06 17:34:40
诱导时间可以降到4小时。

您说的是16℃诱导4个小时是吗？

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6楼2019-05-11 22:55:11
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hyyyver

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑先37℃，1mM IPTG 诱导检测一下有没有表达，同时做一个WB，检测是否有His 标签。
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2楼2019-05-06 15:36:24
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许苏南

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2019-05-06 16:32:50
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
诱导时间可以降到4小时。

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生物资源交流QQ群：1044518333
4楼2019-05-06 17:34:40
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