应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 反相HPLC分离天然多肽
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
131/2返回列表12下一页
查看: 1625  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者嘟嘟熊levi将赠送您 10 个金币

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)

[求助] 反相HPLC分离天然多肽已有3人参与

各位老师，最近实验从天然中药材中分离小分子多肽。
    粉碎药材后，PBS浸泡，离心取上清，3000Da透析袋透析，收集小分子多肽。分子排阻色谱分离，收集洗脱峰，进行HPLC分离鉴定。
    采用梯度洗脱，A：水；B：含有0.1%TFA的乙腈。0 min，A：99%，B：1%；25 min，A：95%，B：5%；32 min；A：85%，B：15%。
    问题是不加TFA没有多肽峰，加了0.1%TFA，基线不稳。整个实验中HPLC的重复性很差。请问各位老师，有什么好方法吗？不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
我凝望天涯，寻觅我的诗句
1楼2018-09-12 14:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwmgyp

版主 (知名作家)

搬砖将

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
波长是不是接近末端的？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
gwmgyp
2楼2018-09-13 00:13:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)
波长是220nm的。
回复此楼
我凝望天涯，寻觅我的诗句
3楼2018-09-13 11:23:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwmgyp at 2018-09-13 00:13:25
波长是不是接近末端的？

就是梯度洗脱为什么基线是飘得。乙腈的用量增多，基线就慢慢上移。这个有没有办法解决啊？谢谢。
赞一下 回复此楼
我凝望天涯，寻觅我的诗句
4楼2018-09-13 11:24:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天涯不归路

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你走下空白看看基线还飘不飘，看看飘是你样品引起的还是本身就会飘？
之后你要研究你要分离的多肽的性质，选择的洗脱液是不是合适，是不是可以换成其它，另外可不可以换换凝胶颗粒去分离
赞一下 回复此楼
为了明天而努力
5楼2018-09-13 11:54:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 天涯不归路 at 2018-09-13 11:54:51
你走下空白看看基线还飘不飘，看看飘是你样品引起的还是本身就会飘？
之后你要研究你要分离的多肽的性质，选择的洗脱液是不是合适，是不是可以换成其它，另外可不可以换换凝胶颗粒去分离

在220nm下，检测基线就是逐渐上移的。在280nm下，基线就平稳。只是多肽要求是220nm检测，用酶标仪测试也是，220nm的峰很多，280nm要少一些。
赞一下 回复此楼
我凝望天涯，寻觅我的诗句
6楼2018-09-13 14:35:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天涯不归路

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 嘟嘟熊levi at 2018-09-13 14:35:56
在220nm下，检测基线就是逐渐上移的。在280nm下，基线就平稳。只是多肽要求是220nm检测，用酶标仪测试也是，220nm的峰很多，280nm要少一些。...

280可能有一些峰被掩盖了吧！还是用峰多的那个，看看能不能调整下洗脱速率和梯度，把峰拉开！选择你要的那个峰值去接收！
赞一下 回复此楼
为了明天而努力
7楼2018-09-13 21:03:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王勃

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先扫一个全波长，看看样品的最大吸光值，再有建议流动相A液也加上0.1%TFA
赞一下 回复此楼
我相信我自己
8楼2018-09-14 10:21:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王勃 at 2018-09-14 10:21:51
先扫一个全波长，看看样品的最大吸光值，再有建议流动相A液也加上0.1%TFA

谢谢指点。全波段扫描，主峰在210nm左右，260nm有一个小的吸收峰。更多的论文中说多肽检测是220nm。
赞一下 回复此楼
我凝望天涯，寻觅我的诗句
9楼2018-09-14 11:13:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟熊levi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王勃 at 2018-09-14 10:21:51
先扫一个全波长，看看样品的最大吸光值，再有建议流动相A液也加上0.1%TFA

谢谢指点。全波段扫描，主峰在210nm左右，260nm有一个小的吸收峰。更多的论文中说多肽检测是220nm。
赞一下 回复此楼
我凝望天涯，寻觅我的诗句
10楼2018-09-14 11:14:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 嘟嘟熊levi 的主题更新
131/2返回列表12下一页
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] with editor 两个月了，什么原因？ +7 yiersan9 2024-04-24 16/800 2024-04-27 03:25 by yiersan9
[找工作] 普通院校药学硕士，做合成的，感觉找不到工作 +10 pom戴墨镜 2024-04-24 17/850 2024-04-26 23:23 by ZZZemmm
[论文投稿] LWT投 +3 AChen92 2024-04-26 3/150 2024-04-26 22:16 by hizifu
[基金申请] 基金开始函评了吗？ +16 wych1103 2024-04-25 16/800 2024-04-26 21:32 by 淀粉搬运工
[有机交流] 环肽的合成 +3 徐来不惊 2024-04-25 5/250 2024-04-26 16:56 by 徐来不惊
[考研] 0854－0855调剂 +8 shangannum1 2024-04-21 12/600 2024-04-26 16:42 by yz仔
[考博] 申博求助 +4 dskabdh 2024-04-24 11/550 2024-04-26 15:54 by dskabdh
[硕博家园] 考研，求职还是考编? +15 xizj 2024-04-21 24/1200 2024-04-26 11:49 by Kan客
[基金申请] "颜宁:基础研究应顶天立地"能做到基础研究同时顶天立地的才是牛人 +5 zju2000 2024-04-24 5/250 2024-04-26 09:36 by LittleBush
[教师之家] 刚博士毕业，入职普通一本高校 +19 保持肌肤 2024-04-20 20/1000 2024-04-26 09:16 by zhaojp918
[考博] 取博导收留 5+4 zzb777888 2024-04-20 10/500 2024-04-26 08:52 by polymerfriend
[教师之家] 某种做法不行。说过几遍了。同学还那样做。再那样做就给低分 +4 河西夜郎 2024-04-24 4/200 2024-04-26 08:51 by Quakerbird
[论文投稿] Nature一直在编辑手里，考虑好几天了，是悬了吗 +12 彩虹初见 2024-04-24 12/600 2024-04-25 19:21 by 雪径踏青
[教师之家] 期末给学生划重点都是什么话术啊 +16 luokereng 2024-04-20 18/900 2024-04-25 15:46 by BusyGer
[考博] 求博导 +6 好okjh 2024-04-21 10/500 2024-04-25 14:04 by 好okjh
[论文投稿] 一直找不到审稿人 +5 lizhengke06 2024-04-21 6/300 2024-04-25 14:01 by chongdong
[基金申请] 国社科项目，你们学校都限额申报吗？ +7 屡战屡败 2024-04-21 10/500 2024-04-25 12:10 by 屡战屡败
[考博] 24年 申博 化学/材料 一作6篇sci +9 wangyp123 2024-04-23 11/550 2024-04-24 19:01 by bangbangbiu
[考博] 研二光催化6月底4篇2区 +7 wjtab 2024-04-22 11/550 2024-04-23 06:59 by byron2012
[论文投稿] 研究光催化的，好中的三四区 20+3 sl.0117 2024-04-20 3/150 2024-04-22 09:53 by bobvan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭