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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....已有4人参与

用的康为世纪包涵体纯化试剂盒。binding buffer 中的咪唑浓度为5mM，洗杂蛋白也是5mM的，这次做了梯度洗脱，10，50，100，150，200，250，300，350，500，如下图图一。另一张图是以前用500mM咪唑洗脱的 ，梯度洗脱也洗不到纯的 好想哭，做了两个月的纯化了

求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....


求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-1


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1楼2018-02-05 15:42:44
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by why9639 at 2018-02-06 09:09:25
包涵体的我不太清楚，之前我做过胞外表达的酶，用AKTA蛋白纯化仪 基本上可以说就纯化不到纯酶，加样量增加，就能看到杂蛋白条带。若果是有设计组蛋白标签的，用镍柱会得到相对比较纯的酶

感谢！我用的就是镍柱纯化的

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9楼2018-02-07 22:09:21
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-2

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2楼2018-02-05 15:45:14
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
表达量也可以 但是一纯化就少

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3楼2018-02-05 15:45:23
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苏氨酸

新虫 (小有名气)
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

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4楼2018-02-05 15:54:39
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