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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....已有4人参与

用的康为世纪包涵体纯化试剂盒。binding buffer 中的咪唑浓度为5mM，洗杂蛋白也是5mM的，这次做了梯度洗脱，10，50，100，150，200，250，300，350，500，如下图图一。另一张图是以前用500mM咪唑洗脱的 ，梯度洗脱也洗不到纯的 好想哭，做了两个月的纯化了

求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....


求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-1


@biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼2018-02-05 15:42:44
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爱科研嘛

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zsygxh at 2018-02-07 23:25:27
这个过于简单化了，这里没给出裂解液的配方，我不知道里面有没有加去污剂，你晃一下裂解液，看它是否容易产生泡沫，如果没有，那这个过程跟本没洗包涵体，只是简单破了菌，你可以在破菌后用buffer加0.5% Triton X- ...

你好，你之前用的多大浓度的还原剂洗去包涵体和杂蛋白之间的二硫键？

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22楼2018-11-27 20:41:48
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
求助 蛋白纯化不出来 每次都有杂带 想哭....-2

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2楼2018-02-05 15:45:14
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亲爱的不饿

新虫 (初入文坛)
表达量也可以 但是一纯化就少

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3楼2018-02-05 15:45:23
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苏氨酸

新虫 (小有名气)
包涵体溶解之前，有没有洗杂？建议用低浓度的尿素2M或4M洗杂

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4楼2018-02-05 15:54:39
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