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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酿酒酵母表达，假阳性问题
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母表达，假阳性问题

最近在做酿酒酵母表达，用的菌株BY4742，载体pCEV-G4-Km，G418筛选用的400μg/mL，转化后三天长好的板子，菌落鉴定PCR为阳性（阳性阴性对照都正确），每次摇完的菌液再鉴定就是阴性了（同样阴性阳性都正确），再重复回去做菌落PCR同样变成阴性了，不明状况。
      后来发现G418筛选有问题，空菌株也能长出来，换了一家公司买了新的G418，PBS重新配置，浓度从0-3000ug/mL，设置了7个浓度梯度，空菌株全长出来了，不知道什么原因，现在完全做不下去，想请问大家能不能给些建议？万分感谢
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1楼2018-01-23 09:16:53
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by an安琳 at 2018-04-01 21:19:07
太感谢你啦 能加我qq吗 769132030  或者您留联系方式我加你可以吗  谢谢啦我买了菌株但能在缺陷培养基生长。。叹气...

抱歉太久没有上小木虫，想必你的问题早就解决了吧，我换了菌株后酵母转化体系就很稳定了，如果还需要交流的话你可以加我QQ 2359292750
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10楼2018-10-05 14:30:01
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
我公司经常做酿酒酵母重组表达

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2楼2018-01-23 14:17:14
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-23 14:17:14
我公司经常做酿酒酵母重组表达

能留个联系方式么？
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3楼2018-01-23 15:05:09
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an安琳

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-23 14:17:14
我公司经常做酿酒酵母重组表达

请问您公司卖酿酒酵母BY4742吗
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4楼2018-02-28 20:43:50
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