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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母表达,假阳性问题

最近在做酿酒酵母表达,用的菌株BY4742,载体pCEV-G4-Km,G418筛选用的400μg/mL,转化后三天长好的板子,菌落鉴定PCR为阳性(阳性阴性对照都正确),每次摇完的菌液再鉴定就是阴性了(同样阴性阳性都正确),再重复回去做菌落PCR同样变成阴性了,不明状况。
      后来发现G418筛选有问题,空菌株也能长出来,换了一家公司买了新的G418,PBS重新配置,浓度从0-3000ug/mL,设置了7个浓度梯度,空菌株全长出来了,不知道什么原因,现在完全做不下去,想请问大家能不能给些建议?万分感谢
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biosci

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我公司经常做酿酒酵母重组表达

发自小木虫Android客户端
2楼2018-01-23 14:17:14
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-23 14:17:14
我公司经常做酿酒酵母重组表达

能留个联系方式么?
3楼2018-01-23 15:05:09
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an安琳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-23 14:17:14
我公司经常做酿酒酵母重组表达

请问您公司卖酿酒酵母BY4742吗
4楼2018-02-28 20:43:50
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by an安琳 at 2018-02-28 20:43:50
请问您公司卖酿酒酵母BY4742吗...

看你还需要么?我买了新的菌株 可以给你寄一点
5楼2018-03-14 16:41:18
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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

我最近也刚开始接触毕赤酵母表达系统,我用的载体是ppic9k,菌株是GS115,在做菌落PCR鉴定时全是阴性的话我会提取酵母基因组再进行PCR,可能就会得到阳性条带。楼主可以试试提基因组看下
6楼2018-03-29 14:40:02
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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

楼主的菌株是不是污染了呢,我用G418筛选是过滤除菌后加入到YPD培养基到平板的,0.8mg/mL都筛不到转化子了
7楼2018-03-29 14:47:20
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an安琳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qiaoxiaojing at 2018-03-14 16:41:18
看你还需要么?我买了新的菌株 可以给你寄一点...

太感谢你啦 能加我qq吗 769132030  或者您留联系方式我加你可以吗  谢谢啦我买了菌株但能在缺陷培养基生长。。叹气
8楼2018-04-01 21:19:07
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小豆芽_won at 2018-03-29 14:47:20
楼主的菌株是不是污染了呢,我用G418筛选是过滤除菌后加入到YPD培养基到平板的,0.8mg/mL都筛不到转化子了

抱歉太久没有上小木虫,你说的对,后来发现是菌株的问题,我重新买了新的菌株,0.2mg G418筛选 很稳定了体系就,谢谢回复
9楼2018-10-05 14:27:08
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qiaoxiaojing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by an安琳 at 2018-04-01 21:19:07
太感谢你啦 能加我qq吗 769132030  或者您留联系方式我加你可以吗  谢谢啦我买了菌株但能在缺陷培养基生长。。叹气...

抱歉太久没有上小木虫,想必你的问题早就解决了吧,我换了菌株后酵母转化体系就很稳定了,如果还需要交流的话你可以加我QQ 2359292750
10楼2018-10-05 14:30:01
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