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[交流]
羧基微粒如何有效交联抗体
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请教各位兄弟姐妹们，我再用羧基微粒包被抗体，试过2步法，不加吐温-20反应正常，但容易凝集，在放大规模使用crossfloe时很容易堵住膜，加入0.5%的吐温，即使经过大量清洗还是连接不上。不知道该怎么解决这个问题？另外是否有做过一步法的，我按照网上查的方法，做不出来 过程如下 请各位帮帮忙啦 万分感谢 1. 包被前取微粒（浓度大于20mg/ml，存在于纯水溶液中）.包被前用100mM MES（pH~6）缓冲液清洗1-2次。去除上清液，微粒待用。 2. 用100mM MES（pH~6） 缓冲液透析抗体两次（浓度需大于5mg/ml）。 3. 将抗体和约1% Tween-20加入到去除上清液的微粒中，并补充MES （pH~6）缓冲液（浓度：抗体：大于5mg/ml，微粒：25mg/ml）。 4. 超声混匀并室温震荡30分钟。 5. 加入 约1.2% 60mg/ml NHS和1.2% 100mg/ml EDAC。 6. 在室温震荡上述溶液2小时。 7. 加入20% 100mg/ml BSA溶液封闭，并在室温下震荡过夜。 8. 12000rpm 离心30分钟，用100mM MES（pH~6） 缓冲液清洗，再用测试缓冲液清洗（或者透析），建议清洗时进行超声波处理。 9. 用测试缓冲液配制微粒-抗体溶液调至所需浓度 (含表面活性剂及防腐剂)以备用。 |
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