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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » SDS-PAGE蛋白表达
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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

两种原因，一是mRNA生成后被降解，这个很常见，需要重新构建不同的片段，换不同载体来试表达；而是表达量非常低，没有过量的表征，可以多摇点菌，纯化一次试试

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11楼2016-03-12 09:32:35
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你这个是菌体直接煮沸的后上样么，建议还是细胞破碎后，上清沉淀一起检测，来确定目的蛋白是否表达，或者表达在上清还是包涵体。关于诱导表达，有太多可以优化的条件，一般就是诱导浓度和诱导温度，建议你可以适当降低诱导浓度，我们一般0.4，然后适当延长诱导时间，我们一般过夜诱导，诱导温度可以做个梯度。祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
12楼2016-03-12 09:44:04
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 09:44:04
你这个是菌体直接煮沸的后上样么，建议还是细胞破碎后，上清沉淀一起检测，来确定目的蛋白是否表达，或者表达在上清还是包涵体。关于诱导表达，有太多可以优化的条件，一般就是诱导浓度和诱导温度，建议你可以适当降 ...

我有一个原核表达载体ptrc99a.载体自身不带标签，我想在N端加个his的标签，那启动这个标签直接在标签序列前加ATG么

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13楼2016-09-01 22:58:34
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Anu0103

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是多少度诱导的？
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14楼2017-05-19 11:26:31
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