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francstone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

两种原因,一是mRNA生成后被降解,这个很常见,需要重新构建不同的片段,换不同载体来试表达;而是表达量非常低,没有过量的表征,可以多摇点菌,纯化一次试试

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11楼2016-03-12 09:32:35
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你这个是菌体直接煮沸的后上样么,建议还是细胞破碎后,上清沉淀一起检测,来确定目的蛋白是否表达,或者表达在上清还是包涵体。关于诱导表达,有太多可以优化的条件,一般就是诱导浓度和诱导温度,建议你可以适当降低诱导浓度,我们一般0.4,然后适当延长诱导时间,我们一般过夜诱导,诱导温度可以做个梯度。祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
12楼2016-03-12 09:44:04
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 09:44:04
你这个是菌体直接煮沸的后上样么,建议还是细胞破碎后,上清沉淀一起检测,来确定目的蛋白是否表达,或者表达在上清还是包涵体。关于诱导表达,有太多可以优化的条件,一般就是诱导浓度和诱导温度,建议你可以适当降 ...

我有一个原核表达载体ptrc99a.载体自身不带标签,我想在N端加个his的标签,那启动这个标签直接在标签序列前加ATG么

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13楼2016-09-01 22:58:34
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Anu0103

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是多少度诱导的?
14楼2017-05-19 11:26:31
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