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tan123456

新虫 (初入文坛)

[求助] tricine-sds-page凝胶电泳一大堆问题。求帮忙解决 已有1人参与

最近在分析多肽,想跑tricine-sds-page电泳,可是跑了很多次,每次都是两天两天的做累都累死了,但是还是没一次成功。主要是一个下几个问题:
1)内槽的阴极缓冲液总是往外跑,不知道为什么。做之前用水测漏都没问题,一上电压就开始漏,然后过不了多久就断电停了,又得补阴极缓冲液才能重新开始,电压是30V,所以请问有什么办法可以避免漏吗?用的是天能的垂直电泳仪。
2)我的样品怎么在加到样品槽的时候会漂起来,跟泡泡混在一起,就这么直接就加不到槽里面漂在缓冲液面上,所以造成一大片污染,不知道怎么办。。。
3)一般电压选择多大,我是按照凝胶制备试剂盒说明书上写的,先30V 1小时,然后转100V,这样太慢了,真的好慢好慢,要好久好久。。。。
帮忙呀。。。求帮忙呀。
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tan123456

新虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by nieyuan1s at 2016-02-18 22:22:31
缓冲液没稀释吧,浓缩胶80v分离胶120没问题

缓冲液是2X的呀。。不用稀释吧
6楼2016-02-29 19:35:27
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tan123456

新虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by 15895812751 at 2016-01-24 07:30:00
电压不需要那么小      我都是250V跑到结束

我要的是1K-3K的多肽,电压太高会不会跑散掉呀。。
7楼2016-02-29 19:37:25
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tan123456

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 15895812751 at 2016-01-24 07:29:21
样品里面加甘油    可以让你的样品降下去    蔗糖也可以

样品缓冲液中有甘油呀。。还需要补加吗?那要加多少
8楼2016-02-29 19:39:44
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tan123456

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by 15895812751 at 2016-02-29 20:22:53
甘油20%吧

我看了一下我买的上样缓冲液里面有甘油。。那我再补加一点试试吧。。谢谢了
11楼2016-02-29 21:27:39
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tan123456

新虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by 15895812751 at 2016-02-29 20:22:53
甘油20%吧

应该是我的乙醇含量太高了。。。我是用乙醇提的蛋白。。所以可能导致密度偏小了。我打算多加点上样缓冲液试试吧。。。
12楼2016-03-01 10:20:44
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