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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » 滴定法测定脂肪酶酶活的问题
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雨_轩

木虫 (正式写手)

[求助] 滴定法测定脂肪酶酶活的问题 已有1人参与

各位好，想问一下，基于滴定法测定脂肪酶酶活要求加入4%的聚乙烯醇作为乳化剂，但是，我看文献都是用水溶解，为什么不是用对应的缓冲液溶解呢？有没有特别的说明呢？有对应的生产脂肪酶的测定国家标准方法，但是，用于中药领域脂肪酶抑制剂活性成分活性筛选时，也必须完全用这种方法么？个人感觉是有问题的呀，比如国标中加入5ml缓冲液，4ml底物乳化液，这都是定数，底物是不是足量，反应10min后，应该是已经达到了平衡了吧，我做了两次，结果进行酶浓度考察、底物浓度考察时，发现底物浓度始终是不足量的啊！！，我用的是sigma的猪胰腺脂肪酶。另外最适pH、温度是多少呢？并不是参考文献的7.4、37℃啊，我做的是7.7,42℃啊！求教！！
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1楼 2016-01-21 23:11:43
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novodisk

铜虫 (小有名气)
发现底物浓度不够可以进一步稀释酶溶液的浓度，底物的量是固定的，对应的有适合的酶的浓度才行。
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2楼2018-04-11 13:46:30
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novodisk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这两天做了国标实验，为了保证准确性，对滴定是有要求的，样品和空白之间消耗碱量之差控制在1ml~2ml之间，当超过这个范围时，计算的结果是不准确的，整体结果会偏小，所以当消耗碱量差超过2ml时需要继续稀释酶，直到结果能控制在这个范围内。
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3楼2018-04-24 09:16:46
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