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雨_轩

木虫 (正式写手)

[求助] 滴定法测定脂肪酶酶活的问题已有1人参与

各位好,想问一下,基于滴定法测定脂肪酶酶活要求加入4%的聚乙烯醇作为乳化剂,但是,我看文献都是用水溶解,为什么不是用对应的缓冲液溶解呢?有没有特别的说明呢?有对应的生产脂肪酶的测定国家标准方法,但是,用于中药领域脂肪酶抑制剂活性成分活性筛选时,也必须完全用这种方法么?个人感觉是有问题的呀,比如国标中加入5ml缓冲液,4ml底物乳化液,这都是定数,底物是不是足量,反应10min后,应该是已经达到了平衡了吧,我做了两次,结果进行酶浓度考察、底物浓度考察时,发现底物浓度始终是不足量的啊!!,我用的是sigma的猪胰腺脂肪酶。另外最适pH、温度是多少呢?并不是参考文献的7.4、37℃啊,我做的是7.7,42℃啊!求教!!
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novodisk

铜虫 (小有名气)

发现底物浓度不够可以进一步稀释酶溶液的浓度,底物的量是固定的,对应的有适合的酶的浓度才行。
2楼2018-04-11 13:46:30
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novodisk

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这两天做了国标实验,为了保证准确性,对滴定是有要求的,样品和空白之间消耗碱量之差控制在1ml~2ml之间,当超过这个范围时,计算的结果是不准确的,整体结果会偏小,所以当消耗碱量差超过2ml时需要继续稀释酶,直到结果能控制在这个范围内。
3楼2018-04-24 09:16:46
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