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seven5650

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教:我构建的表达载体为什么每次质粒PCR检测都是阳性,酶切却没有目的片段呢。

请高人指点一下
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seven5650

铜虫 (小有名气)

不好意思,是菌落pcr都是阳性
2楼2008-10-05 14:56:15
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lipishun

金虫 (小有名气)

菌落PCR假阳性的比例是很高的,所以你要么用酶切鉴定了,要么换成载体引物,这样做菌落PCR出来的一般是阳性的。菌落PCR最好用载体引物。
3楼2008-10-05 15:43:16
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

请问 用菌液pcr和提质粒后pcr呈阳性的重组质粒为什么也切不出目的片断呢?(大小200bp)?
4楼2008-10-05 15:50:46
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sumertansy

铜虫 (小有名气)

200bp的小片段,电泳时上样量少(DNA浓度小)或电泳时间长一些可能看不到。
酶切的量大一些,上样多一些,应该可以检测到的。
5楼2008-10-05 15:57:52
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

菌液pcr和提质粒后pcr这两种方法假阳性的概率大不大呀?
6楼2008-10-05 16:24:51
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seven5650

铜虫 (小有名气)

那这么高的假阳性的原因有哪些呢?
7楼2008-10-05 18:33:36
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tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者

:cool把阳性菌送去测序,
8楼2008-10-05 19:48:35
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

只是不知道把握有多大,不能每一个阳性菌都测序呀
9楼2008-10-05 21:02:54
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