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三月三娜

铜虫 (小有名气)

[求助] 从细菌中提取总RNA如何提高实验数量

1.4摄氏度 离心2分钟手机菌体
2 用含有溶菌酶的 te 缓冲液 3mg/ml  培育5-10分钟
3加入350ul  裂解液 RL  (使用前加入 琉基己醇) 震荡均匀  12000rpm 离心2分钟 将上清液移到另一离心管中
4加入250ul 无水乙醇 混匀 溶液和沉淀一起转入 CR3中 12000rpm  离心 30-60 sec  
5吸附柱脆弱
中加入 350ul 去蛋白液 RW1  12000RPM离心30-60sec
下面省略 后几步
  我在雪中完成的 这几布  而且也戴手套 不说话了  
做出来的值  都是个位数  想结果达到100+  请问各位有什么窍门么

从细菌中提取总RNA如何提高实验数量
IMG_20160119_094323.jpg
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所有的牛逼背后都是一道道苦逼,所有的苦逼背后都是一道道的坚持
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)

1、阳性菌的话,可以加大溶菌酶的浓度以及消化的时间
2、除了收集菌体用4度,其他的步骤在室温没有问题,如果太冷反而影响RNA吸附到柱子上,QIAGEN的盒子对于室温操作是这么解释的
3、步骤11可以采用换新的2mL离心管,离心,晾太久恐RNA降解
4、步骤9之后注意不要污染
ok,以上这些都没问题,提RNA应该就没问题了
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2楼2016-01-28 10:36:51
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