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suehe8669

新虫 (初入文坛)

[求助] 单抗制备后期鉴定问题,求助大神帮忙! 已有1人参与

从去年8月份到现在,克隆,纯化蛋白,免疫小鼠,细胞融合,亚克隆,工作量巨大,但也都挺过来了,想要做一株可以鉴定某病毒1型和4型的单抗,现在一共冻存40株细胞,正在做后期检测,收取杂交瘤上清之后,跟免疫小鼠的抗原、1型病毒、4型病毒分别进行ELISA检测,结果做出的这些单抗并不能区分1型和4型,退而求其次,不能区分的话,都可以反应也可以用作其他检测,再做亚型鉴定的时候我崩溃了,大多数的杂交瘤上清都同时有IgG和IgM,只有三株,跟免疫抗原反应值不高跟病毒反应值也很低的杂交瘤是IgG,没有IgM,请教各位大神,这是什么情况?难道这些都不是单克隆吗?细胞已经冻存,接下来该怎么做?难道复苏再克隆吗?附上结果,请大神们帮忙!快过年了,急死我了。。。TOT。。。
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A        0.065         0.050         0.045         0.158         0.283         0.319         0.270         0.269         0.349         1.215         1.092         0.047         450
B        1.140         0.940         1.025         0.362         0.664         0.775         0.635         0.691         0.842         1.117         0.974         0.042         450
C        0.353         0.218         0.219         0.380         0.650         0.720         0.596         0.588         0.815         1.352         0.639         0.043         450
D        0.552         0.447         0.466         0.304         0.514         0.556         0.545         0.537         0.573         1.199         0.926         0.058         450
E        0.449         0.059         0.106         1.198         1.164         1.068         1.120         1.071         1.041         1.259         1.048         0.042         450
F        0.058         0.047         0.045         0.321         0.631         0.675         0.644         0.674         0.852         1.004         0.915         0.043         450
G        0.651         1.014         0.996         1.221         1.096         1.100         1.170         1.000         1.071         1.195         0.922         0.042         450
H        0.347         0.345         0.310         0.230         0.378         0.411         0.372         0.350         0.438         0.507         1.038         0.045         450

A-H分别是IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgA、Igκ、Igλ。
1-10是检测的杂交瘤上清,11是阳性对照,12是sp2/0上清。
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞上清检测室效价其实本身就不是很高,你可以将上清进行浓缩后检测,最好是纯化出抗体后检测。
生命在于运动
3楼2016-01-21 09:50:13
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suehe8669

新虫 (初入文坛)

编辑的时候对齐了怎么发布就变成这样了呢。。。串行了都,450是波长不是12列啊我滴神。。。。
2楼2016-01-20 23:13:47
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suehe8669

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by swlsangon at 2016-01-21 09:50:13
细胞上清检测室效价其实本身就不是很高,你可以将上清进行浓缩后检测,最好是纯化出抗体后检测。

那亚类的测定呢?您是做过这方面的实验吗?我现在很急,老师的意思是年前把鉴定为igG的单抗复苏,然后给小鼠腹腔注射,之后收腹水纯化单抗再检测,可是现在看起来都不纯啊。。。
4楼2016-01-28 13:25:00
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biocherry

铁虫 (正式写手)

5楼2016-01-28 20:12:30
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