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xuox
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| 请问有用过磁性微粒提取DNA吗？用过的麻烦把实验过程告诉小弟一下吧~~文献一直没查到~~谢谢啦~~ 还有不知道能用磁性 微粒将三链DNA与双联DNA分离开来吗？小弟刚下室 很多东西都不懂 希望各位大人多多指教啊~~ |
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mascotte
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司马诸葛(金币+3,VIP+0):谢谢交流 7-23 19:37
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磁珠提取DNA也有不同公司的试剂盒，可能有各自的要求和流程。博日有一种磁珠，具体流程如下：MagaBio 质粒DNA 纯化试剂盒 原理：样品中的DNA在裂解液和蛋白酶K的作用下被释放出来，在结合液的存在下，释放出来的DNA特异性的结合在磁珠上，结合了DNA的磁珠粒子被磁性材料捕获，通过2-3次的洗涤过程将污染物除去，最后在洗脱液的作用下DNA从磁珠上被洗下而被收集。 流程： 1 将Buffer A 放置室内，让其恢复到室温。 2 用150ul Buffer A 重悬细菌体沉淀，然后转移到1.5ml 离心管中，要保证重悬后的没有可见的小块。 3 加150ul Buffer B（使用前，请看重要提示1），轻柔颠倒4～6 次，不要剧烈振动，否则会造成将基因组DNA 被剪切。如果有必要继续颠倒混匀直到溶液变粘稠但清澈可见，不要让反应持续超过5 分钟。 4 加150ul Buffer C，立即轻柔颠倒离心管4～6 次，溶液应该出现絮状物，不会出现局部沉淀。 5 最大速度离心10 分钟，形成紧密的白色沉淀。 6 小心的将上清移到一个干净的2ml 离心管。 7 加300ul Binding Buffer，紧接着加10ul 充分混合的MagaBio Reagent（使用前请充分振荡，保证磁珠均匀的悬浮）。 8 轻柔的混合，将离心管室温孵育10 分钟（每隔2-3 分钟使用旋转振荡器或者手动混匀）。 9 用磁性分离架吸附结合了DNA 的磁珠，吸弃液体，注意：不要吸到黑色的磁珠。将离心管从磁力架上移开，按照下面第10 步来清洗磁珠。 10 加500ul Wash Buffer 到上述的离心管中，充分混匀，再用磁力架吸附吸附，吸弃液体。注意：不要吸到黑色的磁珠。 11 从磁性分离架上移开离心管，按第10 步操作来重复清洗磁珠。 12 加100～200ul Elution Buffer 或去离子水，混合10 分钟。注意：每隔2-3 分钟轻柔混匀。 13 用磁性分离架吸附磁珠，小心将含有质粒DNA 的液体移到干净的离心管里，注意：不要吸到黑色的磁珠。进行下一步的分析实验，如果不是当天用，请保存于-20℃。 将三链DNA分离纯化出来的方法我只知道sephadex凝胶纯化法，是95年白春礼实验室的办法。磁珠的能否分离不大清楚。 |
3楼2008-10-05 09:26:44
xuox 
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2楼2008-10-05 08:40:02
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4楼2008-10-05 19:16:51
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5楼2008-10-08 20:39:25
