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[求助]
假单胞菌 基因敲除 双交换 突变菌株的获得
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各位大侠请求帮助 我做的是假单胞菌羧卞抗性的基因敲除试验，选用的自杀质粒是PJQ200sk gent抗性，将基因的ATG上下游500-600bp片段扩增出来，在ATG下游20bp左右插入卡那霉素抗性基因，然后连入PJQ200sk 1.进行三亲杂交，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，pcr验证能够检测到突变后基因大小的片段，但是扩增不出来假单胞菌其他的基因，蔗糖筛选后也一样 2.进行电转，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，菌液pcr目的基因和其他基因都扩增不到，能再蔗糖板上张，也能在gent抗性的培养基中张 各位大侠帮帮忙 |
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