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zfb0817

新虫 (小有名气)

[求助] 土壤narG、napA基因怎么都扩增不出来,请大神们帮帮忙,谢谢谢谢

想问一下有人做过narG这个功能基因吗,我最近用1960f(5-TAY GTS GGC CAR GAR AA-3)/2659r(5-TTY TCR TAC CAB GTB GC)PCR扩增(650bp),25ul体系引物各1.25ul(10umol/L),Taq酶0.1/0.25都试了,模板2ul(pcr 16S很亮),程序是95℃ 5min,94℃ 30s,59℃ 30s,72℃ 45s;前8个循环每个循环降0.5℃,后30个循环55℃;最后72℃ 6min,做了梯度PCR(47-60℃),可还是什么都没p出来;还试了一下pcr的mix,只有很亮的引物二聚体,麻烦各位大神帮我找找原因,或者有谁做过这个功能基因告诉我一下您的条件,谢谢谢谢;我还想做napA,有人知道的话也可以告诉我一下经验。。。
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到不了的叫远方!
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zfb0817

新虫 (小有名气)

2楼2020-05-14 13:46:21
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