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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 丝状真菌黑曲霉转化求助
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花落已季末

银虫 (小有名气)

[求助] 丝状真菌黑曲霉转化求助 已有2人参与

我是做基因异源表达的，宿主用的是黑曲霉，表达载体用的pBARGPE1，转化采用的是PEG法，做了很长时间了，一直转不进去，抗性筛选用的草铵膦，参考文献里的浓度一般在200~300mg/L左右，我买的进口分装的原药，浓度已经到1200mg/L了，黑曲霉依然生长，现在搞不清楚是哪里的问题，不知道各位虫友有没有这方面的经验，给点宝贵的建议，万分感谢！

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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
1楼 2016-01-15 10:37:54
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我之前是做灰绿曲霉的，也要做PEG介导的转化，然后用博来霉素筛选。
首先你得确定一下，草铵膦是否对你实验室中黑曲霉的野生株真的有效，在此基础上才能继续进行。
当然，也有可能是培养基中的某些成分会阻碍草铵膦发挥作用，我用的博来霉素就是怕光、怕过酸、怕过碱、怕盐离子，所以用的时候需要非常注意，建议查一下草铵膦的说明书或者原理。
赞一下 回复此楼
实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
2楼2016-01-15 16:26:26
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dmy653

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主的问题最后解决了吗？草铵膦筛选转化子有没有成功？
赞一下 回复此楼
3楼2020-03-20 17:00:40
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