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花落已季末

银虫 (小有名气)

[求助] 丝状真菌黑曲霉转化求助已有2人参与

我是做基因异源表达的,宿主用的是黑曲霉,表达载体用的pBARGPE1,转化采用的是PEG法,做了很长时间了,一直转不进去,抗性筛选用的草铵膦,参考文献里的浓度一般在200~300mg/L左右,我买的进口分装的原药,浓度已经到1200mg/L了,黑曲霉依然生长,现在搞不清楚是哪里的问题,不知道各位虫友有没有这方面的经验,给点宝贵的建议,万分感谢!

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流年似水,看不透的是红尘中镜花水月;往事如烟,挥不去的是岁月荏苒一过往;待得繁华落尽,只余回忆。
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我之前是做灰绿曲霉的,也要做PEG介导的转化,然后用博来霉素筛选。
首先你得确定一下,草铵膦是否对你实验室中黑曲霉的野生株真的有效,在此基础上才能继续进行。
当然,也有可能是培养基中的某些成分会阻碍草铵膦发挥作用,我用的博来霉素就是怕光、怕过酸、怕过碱、怕盐离子,所以用的时候需要非常注意,建议查一下草铵膦的说明书或者原理。
实时荧光定量PCR(TaqMan探针法)欢迎和大家探讨~
2楼2016-01-15 16:26:26
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dmy653

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主的问题最后解决了吗?草铵膦筛选转化子有没有成功?
3楼2020-03-20 17:00:40
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