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请教一下关于沉淀蛋白的问题
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我的样品是血液以及组织样品，根据文献方法，需要先用Triton溶液匀浆破碎，然后用终浓度5%的磺基水杨酸沉淀蛋白，然后HPLC测量药物浓度。 但我实验中发现，用磺基水杨酸沉淀蛋白似乎效果非常差。加酸混匀以后，离心出来的上清是褐色的，颜色很深，特别是血液以及血液含量丰富的器官比如肝脾。也许还有乳化问题，上清在冰箱静置过夜以后会再次出现大量沉淀，颜色会略变浅，但还是很深。离心进样后杂峰非常得多。 又作了2倍体积的甲醇沉淀方法，处理后样品颜色是略微淡黄色，要浅很多，冷冻后也没有再次出现沉淀，跑HPLC杂峰也要少很多。 但问题是我的样品的药物浓度已经比较偏向检测下限，如果用甲醇沉淀法，会再次稀释样品，而且甲醇法的药物回收率只有40%上下。用酸沉淀法不会稀释样品，回收率有60%多。 请教一下，酸沉淀血液样品蛋白，这种现象是否正常，能否改进？我是否还应该用这种方法处理样品？ |
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