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ch94031158

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]+柱层析时组分洗脱不下来

我分离的样品不是药物的目的,但是知道药分版由很多层析的高手,故特来求教。
总脂提取物中定量分析中性脂(植物提取物,其中含有多种色素和极性脂),用硅胶60A 细长柱,氯仿洗脱,在先前的实验中可以很好的洗脱出中性脂(含少量类胡萝卜素),保留极性脂和叶绿素在固定相中;最近同样的条件却出现几种异常:1. 洗脱曲线是反的,而且相对于正常情况时洗脱剂的用量增加很多,或者说以前可以用100mL氯仿洗脱回收率可以达到99%,现在回收率却只有50%;2.叶绿素以前是牢牢吸附在硅胶表层的,现在却可以跑的很远,甚至有时候会被洗脱下来;3.现在的情况更蹊跷,干脆什么都不下来了,几倍量的氯仿也洗脱不下什么东西。
相对于以前改变的条件有:1.原来的硅胶用完了,新换的硅胶状况就很不稳定,不正常的情况居多;
2. 总脂提取的时候用饱和氯化钠分层,以前是用水,但是容易出现乳化,相信应该没有多少盐进入有机相。

请各位高手帮忙分析下问题所在和解决方法。我只是要求分开中性脂和极性脂两大类就可以。谢谢回复。
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匿名

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clkk216(金币+1,VIP+0):3Q o(∩_∩)o...
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2楼2008-10-02 18:00:27
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jane291

金虫 (小有名气)


karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢参与交流!
lz用的硅胶柱是反复使用的吗?

要不然一个本来可以洗脱下来的流动相体系不会毫无重复性的

如果lz处理样品的方法没有做改变的话,那么试试把新硅胶处理一下,用空白流动相走一遍(流动相不含水)然后把硅胶放1290度烘一小时

[ Last edited by jane291 on 2008-10-3 at 08:41 ]
3楼2008-10-03 08:37:53
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ch94031158

木虫 (小有名气)

2楼的方法我试过,2%的甲醇就让叶绿素洗脱下来了,看来是不合适的。
我很同意3楼的看法,应该是硅胶失火;我的柱子都是一个样填一次,以前的老硅胶,柱子装得再乱,也是该洗脱的洗脱,该吸附的吸附。我尝试下把硅胶活化下看看,但是不明白为什么要先用流动相走一下。
谢谢2,3楼的意见。
4楼2008-10-03 23:54:58
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ch94031158

木虫 (小有名气)

我用纯的中性脂来做洗脱试验,发现回收i率极低,说明试验中所用的硅胶对中性脂的吸附力太强。理论上讲应该降低硅胶的吸附性,加一定量的水平衡。但是实际样品洗脱时,有部分叶绿素被洗脱,反而是中性脂洗脱不下来。 洗脱溶剂一直都是氯仿,以前的硅胶一直效果都很好,所以应该不是氯仿的问题。
不知道硅胶到底出什么问题了,该如何处理。
5楼2008-10-07 11:52:26
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