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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 体外转录问题求助

利用pGEM-T载体进行体外转录，目标片段只有150bp左右，线性化质粒载体后怎么转录出来的产物怎么差不多有750bp大小了？
图片中前面两个孔分别是Sp6和T7转录后未经过DNAse处理的，后面两个孔是经过DNAse处理的。

体外转录问题求助
体外转录效果检测.jpg
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
1楼 2016-01-14 10:00:05
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
我想要体外转录dsRNA，已经在上下游引物的5'端都加了T7启动子序列，但是胶回收得率很低，只有大概40ng/ul，远达不到体外转录试剂盒要求的起始模板量，所以想将PCR产物克隆到带T7启动子的载体上，比如pEASY-T1-simple，现在问题是这类的载体的T7启动子离插入片段都至少有几十bp的距离，我想问这几十bp的非目的片段是否会影响体外转录后生成的dsRNA
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2楼2017-09-15 12:36:07
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