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根际微生物与内生菌的过渡型微生物分离和纯培养
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根际微生物与内生菌的过渡型微生物的分离和纯培养 一.概述 在根际微生物中有一些微生物，用一般根际微生物的分离方法是分离不出来的。这些微生物的主要养分是来自植物的分泌物，没有植物分泌物的供应，这些微生物的生长、发育和繁殖就受到阻碍，而它们又缺乏侵染、定植于植物的能力，因此它们是根际微生物与内生菌的过渡型的微生物。这些微生物是否是微不足道的？不！在根际生态学上，以及根际微生物群落中是不可或缺的组成部分。过去土壤微生物研究者对它们关注得很少，有了对这些微生物的研究和探索，对根际微生物的研究就更加完整，距揭开根际微生物群落的各种生物特性和生态现象就更近一步了。 二.分离 1. 样品的采集 1.1挖取完整的根系的土块，作为样品，同时采同一块田的无作物的相同深度的土壤作为根外对照土。把土块用硫酸纸包好，带回已消毒灭菌的实验内，争取当天进行微生物分离试验等。 2. 分离方法 2.1 培养基配方和配制 （1）. NH4NO3 1650mg/L CaCl2 350mg/L KH2PO4 1000mg/L MgSO4.7H2O 250mg/L ZnSO4.7H2O 20mg/L 蔗糖 10000mg/L 琼脂 20000mg/L 蒸馏水 800ml 植物浸提液（即含有植物内生微生物群落的植物浸提液，自然含有上述的特殊化学能的组分，需经过过滤灭菌器灭菌） 200ml 再经高压蒸汽灭菌，然后使其降温至摄氏60~70度，备用； （2）. 蛋白胨 5g/L 酵母浸粉 3g/L 硫胺素 10mg/L 加70ml蒸馏水混合均匀，再经过滤灭菌器灭菌，备用； （3）. 将上述的 （1）和（2）混合均匀， 备用。 2.2 先把附着于根上多余土先抖掉，然后把紧密附着于根上的土粒用适量无菌水浅盘浸泡数分钟，洗涤下土粒，除去根； 2.3 在无净操作台上，用灭菌的定量滤纸除去土样品的多余水分，用无菌的不锈钢的小勺把10g（湿）的土样品加入200ml的三角瓶（已灭菌）的一角处，从另一角以适当的速度加入培养基，尽量不冲散土样品，用培养基护盖住土样品，待培养基凝固，冷却至室温，用无菌膜密封住瓶口，在缺氧条件下以及在摄氏25~28度下，培养10~15d，即可分离出所需的兼性厌氧菌。 2.4 用2.1~2.3的相同方法对‘对照土’进行相同的试验。 三. 纯培养 3.1 从2.3中分离的菌落挑取少量菌种，接种于培养皿的培养基上进行纯培养。 四.结果分析 …… |
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