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山水之间11

新虫 (小有名气)

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专业: 发育生物学

[求助] 求大神帮忙解答问题，越详细越好。多谢！

1、利用荧光蛋白转基因的方法研究未知功能蛋白的亚细胞定位时，该蛋白连接在荧光蛋白的N端好，还是连接在荧光蛋白的C端较好？具体研究中应该采用什么策略？
2、为什么利用荧光蛋白研究未知功能蛋白的亚细胞定位时，尽量不采用瞬时转染和强启动子的方法？
3、简述利用BiFC技术测定细胞Ca2+浓度的载体的工作原理?

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1楼 2016-01-11 11:49:18

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taotaorui

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
山水之间11: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2016-01-15 16:19:45

1.不懂
2.存在过表达的问题。导致定位不准确。
3.当钙离子与CAM蛋白结合时，引起CaM蛋白与M13蛋白的空间结构发生改变：由原先松散的哑铃形到紧密结合的球形，从而使其两端的荧光生色的供体和受体BCFP/EYFP之间的荧光共振能量转移（FRET）发射的荧光强度升高，供体BCFP发射的荧光强度降低，即535nm/480nm发射波长比值升高。

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2楼2016-01-15 11:37:21

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