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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请问为什么有些表达载体的多克隆位点之间，有时会插入一个核苷酸，从而导致移码？
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 请问为什么有些表达载体的多克隆位点之间，有时会插入一个核苷酸，从而导致移码？ 已有1人参与

请问为什么有些表达载体的多克隆位点之间，有时会插入一个核苷酸，从而导致移码？

比如这个pet32a的，为什么最后要在XHOI前面加个A呢，导致后面的his tag不能翻译成his，而是pro，而且多了几个氨基酸的大小才结束

直接到his tag后面的TGA结束不行吗？


我换载体后，还是用之前引入酶切位点的目的基因进行实验，3'端没有多加碱基，导致在his tag后面就直接结束了
请问会对表达有影响吗？

请问为什么有些表达载体的多克隆位点之间，有时会插入一个核苷酸，从而导致移码？-1
我看这个pet32还有b和c系列的，就是多一个或者少一个核苷酸，导致在最后的结束位点这里有所不同
所以还想问一个问题，它这样设计的目的是什么呢？
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1楼 2016-01-11 11:22:29
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
标签是否移码是要看起始密码子的位置和插入片段的长短决定的，酶切位点之间的碱基是专门插入的。abc三个质粒是为了方便不同长度的目的片段插入的。一般你已经有目的片段的时候，选择abc中那个不会造成移码的。不知道我说明白没。
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2楼2016-01-11 11:47:08
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