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yly1991yd木虫 (小有名气)
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[求助]
Fluo 3/AM染色后怎么在流式细胞仪上检测，求具体一点的步骤~
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小妹最近在做Fluo3/AM胞内钙离子染色，用普通的荧光显微镜观察，也有很多问题。 具体步骤，用的是1mM的母液，含钙镁的hanks液将30微升母液稀释到1mL，37度1h，室温下20min左右，因为拍照还需要很久，所以有时候也不再室温下孵，直接拍照的。之前按说明书的浓度1-5uM，感觉荧光很弱。 所以在这里求各位大神，有没有具体的染色步骤，荧光到什么程度就算可以了呢~还有就是拍照的时候背景比较绿，开灯的话更加绿，所以我一直都关着灯拍。 老师最近说要做流式看看荧光，所以具体步骤我也不是很清楚，六孔板养，什么时候加药，上机前怎么处理。 还有一个问题：我加了药之后，药物浓度高的明显细胞少些，这样的话细胞量不一样我加了一样的荧光探针，是不是没什么意义，细胞少的就会比较亮一些，不能说明药物的原因~目前感觉就是细胞少会亮一些 |
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