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zhfflying

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物设计 已有1人参与

请大家帮忙看看,这个引物是怎么了?设了好多次都不行,再这么下去老师的钱要被我花光了

引物设计


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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道楼主想表达的主要问题是什么,以及pcr的目的,个人猜想:1,如果扩增目的条带做简单克隆,那么图里的问题又没说明白,是完全没有目的条带?还是有目的条带,但特异性不好?如果是前者,建议分析目的基因的GC含量是否过高,可调换GC buffer,另外退火温度是最常见的问题;如果是后者,特异性不好原因很多,首先,楼主模板是基因组还是质粒呢,如果基因组,存在非特异性条带很正常,甚至有时候无法避免,对于简单目的基因克隆来说,只要目的基因扩增浓度够,完全可以直接胶回收继续下游实验;如果是质粒,出现非特异性条带主要就是退火温度,可以尝试温度梯度摸索最适温度!如果楼主pcr是筛选文库,还是主要看有没有目的条带吧

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-01-10 22:01:38
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zhfflying

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-10 22:01:38
不知道楼主想表达的主要问题是什么,以及pcr的目的,个人猜想:1,如果扩增目的条带做简单克隆,那么图里的问题又没说明白,是完全没有目的条带?还是有目的条带,但特异性不好?如果是前者,建议分析目的基因的GC含 ...

谢谢,太受用了,我做荧光定量,然后引物不特异

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3楼2016-01-15 10:38:27
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