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引物设计 已有1人参与
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请大家帮忙看看，这个引物是怎么了？设了好多次都不行，再这么下去老师的钱要被我花光了 发自小木虫Android客户端 |
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原海亮
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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不知道楼主想表达的主要问题是什么，以及pcr的目的，个人猜想:1，如果扩增目的条带做简单克隆，那么图里的问题又没说明白，是完全没有目的条带？还是有目的条带，但特异性不好？如果是前者，建议分析目的基因的GC含量是否过高，可调换GC buffer，另外退火温度是最常见的问题；如果是后者，特异性不好原因很多，首先，楼主模板是基因组还是质粒呢，如果基因组，存在非特异性条带很正常，甚至有时候无法避免，对于简单目的基因克隆来说，只要目的基因扩增浓度够，完全可以直接胶回收继续下游实验；如果是质粒，出现非特异性条带主要就是退火温度，可以尝试温度梯度摸索最适温度！如果楼主pcr是筛选文库，还是主要看有没有目的条带吧 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-01-10 22:01:38
3楼2016-01-15 10:38:27
