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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 双交换后的抗性基因如何去除
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)

[求助] 双交换后的抗性基因如何去除 已有1人参与

近期，在革兰氏阳性菌中用电转化得到了双交换后的带有抗性基因的目的菌，如何把这个抗性基因去除掉？可以选用非抗性培养来筛选吗？
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1楼 2016-01-10 17:23:15
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-10 23:11:45
我这样理解的，楼主获得的抗性菌株其实是只发生一次交换后（单交换）的菌株，下面的丢抗就是促使其发生第二次交换，来获得最终的双交换突变株。那么常用的方法是无抗松弛培养(不同菌松弛培养的代数不同)，可以平板影 ...

我是已经得到了抗性的菌，利用的是一步置换法，现在我想把抗性去除，是不是能通过无抗性筛选来做呢？
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3楼2016-01-11 12:55:30
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:40:22
我这样理解的，楼主获得的抗性菌株其实是只发生一次交换后（单交换）的菌株，下面的丢抗就是促使其发生第二次交换，来获得最终的双交换突变株。那么常用的方法是无抗松弛培养(不同菌松弛培养的代数不同)，可以平板影印来对比筛选，也可以挑取单交换菌株液体松弛培养后，涂无抗平板，对生长的菌进行抗性平板筛选来获得。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-01-10 23:11:45
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
仇峰12306: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-12 16:04:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-01-11 12:55:30
我是已经得到了抗性的菌，利用的是一步置换法，现在我想把抗性去除，是不是能通过无抗性筛选来做呢？...

可以的，松弛培养就是无抗培养，有的菌需要松弛好几代才会丢抗

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-01-11 19:23:58
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仇峰12306

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-11 19:23:58
可以的，松弛培养就是无抗培养，有的菌需要松弛好几代才会丢抗
...

我是直接通过在抗性基因上加同源臂，然后导入细胞中进行双交换整合到染色体上的，不是通过单交换得到的。可以通过无抗培养来丢失抗性吗？还有别的方法来把抗性删除吗？
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5楼2016-01-12 16:02:07
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