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新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 149.8
散金: 20
帖子: 49
在线: 12.9小时
虫号: 4030407
注册: 2015-08-20
性别: MM
专业: 作物分子育种

[求助] 求固相萃取仪的使用经验已有1人参与

各位虫友，
      我想请教下关于固相萃取仪及如何使用它对物质进行纯化，之前从来没用过，请用过的虫友们分享下经验。我这是在纯化全麦粉中提取的叶酸（维生素B9）。
这是我的纯化条件（我对它的理解是这样的，请指正哈）

实验仪器及耗材：固相萃取仪，Baker 7091-3萃取小柱（图片是在网上down的，实验室还没买，如果虫友有推荐的品牌，求分享）
实验试剂：己烷、甲醇、0.1M 磷酸氢二钾（pH8-9）、0.1M乙酸钠（pH4.5）、0.1%抗坏血酸、0.1% 2-巯基乙醇

实验步骤： 1、活化柱子→先加3ml 己烷后加3ml 甲醇润洗柱子
               2、平衡柱子→5ml 0.1M磷酸氢二钾溶液润洗
               3、上样→用5ml 提取液溶于2ml 磷酸氢二钾中，洗脱速度0.6ml/min
            4、冲洗→柱子用2ml 磷酸氢二钾溶液润洗
            5、洗脱出样品用3ml 0.1M乙酸钠（pH4.5）（有5% 磷酸氢二钾、0.1%抗坏血酸、0.1% 2-巯基乙醇）洗提，最终过0.45um 过滤亲水膜

   问题：1、活化，上样，润洗，冲洗每一步大约是多久呢？
               2、我只需收集最后洗脱出来的样品，那前四步滴加的液体会被柱子吸附而不会留下来对吧？
               3、柱子是可以循环利用的么？还是一次性的呢？

捕获.PNG