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嘉茗ZZ

银虫 (正式写手)


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细胞转染问题
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我转染两个细胞系,除了细胞不一样,其他所有条件都一样,转染24小时之后在荧光显微镜下看都有gfp绿色荧光,之后我就筛选来得到稳转细胞,二周之后筛选结束,没有转染的细胞系细胞都死光了,得到筛选的稳转细胞,结果有一个细胞系的所有转染细胞都没有绿色荧光,而且在可见光下能看到有筛选之后留下来的细胞,而另外那个细胞系的转染细胞就都能看到绿色荧光,这是为什么?

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xiaoguai5431

金虫 (小有名气)


12楼2016-01-08 05:47:59
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聚晟

铜虫 (著名写手)


13楼2016-01-08 06:52:36
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hotwater

铁杆木虫 (著名写手)


15楼2016-01-08 07:08:00
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嘉茗ZZ

银虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by hotwater at 2016-01-08 07:08:00
细胞不同吧

主要是lipo3000不太可能一点也没转进去,我筛选之前还看到了绿色荧光,筛选完就没了

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16楼2016-01-08 10:01:46
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198866

铜虫 (小有名气)


17楼2016-01-08 10:56:42
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chlorella409

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
细胞株的筛选压力还在么,会不会掉了,掉了,了。
18楼2016-01-08 16:11:33
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
筛选的阶段,你没有对这两个细胞进行持续的荧光观察?GFP荧光的丢失应该是渐进变化的过程。GFP的存在与否和编码GFP的基因有关,细胞筛选和抗性基因有关,药筛只能说明抗性基因还在,GFP编码基因和目的基因在不在还有待确定,简单粗暴的方法就是测序
19楼2016-01-08 21:07:25
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嘉茗ZZ

银虫 (正式写手)


引用回帖:
19楼: Originally posted by yyy0305 at 2016-01-08 21:07:25
筛选的阶段,你没有对这两个细胞进行持续的荧光观察?GFP荧光的丢失应该是渐进变化的过程。GFP的存在与否和编码GFP的基因有关,细胞筛选和抗性基因有关,药筛只能说明抗性基因还在,GFP编码基因和目的基因在不在还有 ...

看看我的gfp序列还在不在?噢,谢谢

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20楼2016-01-08 22:08:35
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科研小狗

新虫 (初入文坛)


21楼2016-04-05 23:41:38
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嘉茗ZZ

银虫 (正式写手)


引用回帖:
21楼: Originally posted by 科研小狗 at 2016-04-05 23:41:38
我也是

我老板说我的细胞不喜欢gfp,所以让我换别的荧光了

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22楼2016-04-06 02:07:21
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MAYINGTAI2楼
2016-01-08 05:19   回复  
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王顺平3楼
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晴天f6楼
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jeolion7楼
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nbjiuxu8楼
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oedcad10楼
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强壮11楼
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xdl198214楼
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