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荧光发射图谱出现瑞利散射，瑞利散射对所测的荧光基团强度有影响吗 已有1人参与
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扫描FAM荧光探针的发射谱图，设定激发波长480nm，扫描范围480—600nm。 结果： 在488nm处出现了1个极大峰强度600左右（传说中的瑞利散射？），在519nm处出现目标峰，强度只有20。 请问荧光强度除了与荧光探针浓度有关外（本次探针浓度50nM），瑞利散射会不会对荧光强度有削弱作用，削弱强度明显吗？怎么消除瑞利散射？ 还有个问题，发射谱图与同步谱图各自作用是什么？ 刚刚接触，小白一枚，请各位大神多多指教！！ |
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【答案】应助回帖
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此峰应当不是瑞利散射，瑞利散射通常与入射波长相同，或者是整数倍频(多级瑞利散射)。根据提供的资料，此峰可能是拉曼散射，拉曼散射的峰值一般比荧光值小很多，但在样品浓度低，仪器灵敏度高时，可能会出现很强的拉曼峰，甚至高于荧光 以下是不同浓度硫酸奎宁的荧光谱图 链接: https://pan.baidu.com/s/1xz-ihxMzZjeAK0ZC9d_PaQ 提取码: suaa 同步谱的问题也放张图吧，更好理解 链接: https://pan.baidu.com/s/1Od1sSnB_GMAHKOT3p_AY-A 提取码: daya 更多可以参考 荧光分析法 许金钩著 在下也是新人，有问题一起讨论  [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
4楼2019-03-17 10:37:07
Ars_zq
新虫 (正式写手)
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瑞利散射光波长与入射光波长一致，488处是拉曼散射。要避免散射干扰，可以扣除背景或选择其它波长激发。 恒波长同步荧光在平时用得较多，主要是针对被测物中有两种或以上荧光物质，但无法用同一激发波长去检测时使用。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2016-01-12 15:02:34
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（1）你在测试荧光的过程中可能有拉曼散射的干扰 （2）光散射分为瑞利散射（波长与激发波长相同），和拉曼散射（与激发波长不同）；拉曼散射又分为Stokes线（波长比激发波长大的部分，强度大，我们一般所说的拉曼光谱）和Anti-Stokes线（波长比激发波长小的部分，强度小，一般不关注）。 （3）所以488nm除肯定不是瑞利散射，可能是拉曼散射。 （4）瑞利线本身很强，会对荧光有明显影响，消除瑞利散射只需要扫描范围不包含原激发波长就行。 （5）消除拉曼散射也可以如（4）不包含拉曼线就行，但也可以改变激发光波长来消除。 （6）发射谱是在固定某一个激发波长情况下，探究不同波长处的荧光强度。 （7）同步谱：应该是变化激发波长和发射波长，采集可得到一个3D荧光强度分布图，即荧光强度----激发波长----发射波长的三维图谱。 |
3楼2016-01-14 22:16:46
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